一、康莱胶囊对荷瘤小鼠抗肿瘤作用的实验研究（论文文献综述）
钟鹏程[1]（2021）在《艾可清颗粒减轻环磷酰胺心脏毒性的作用及机制研究》文中研究说明目的:作为一线肿瘤化疗药物及强力免疫抑制剂,环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）广泛应用于多种恶性肿瘤及自身免疫性疾病的治疗。然而,CTX在发挥治疗作用的同时也可引起多种严重不良反应,如骨髓抑制、心脏毒性、肝功能损害、出血性膀胱炎等。此外,在中医药基础科研领域,CTX常被用作复制中医阳虚、血虚证候动物模型的药物。目前针对CTX毒副反应尚无特效药物,预防或缓解CTX化疗导致的毒副反应对于提高肿瘤治疗效果具有重要的临床意义。艾可清颗粒（AKQ）作为广州中医药大学热带医学研究所创制的专利复方,在艾滋病治疗方面已运用多年,具有增强艾滋病患者免疫力、提高生活质量的作用。本课题组认为AKQ扶阳益气、补肾健脾的功效用于CTX引起的气阳两虚、脾肾双亏副作用的“纠偏”,在理论上具有针对性。基于此,本研究以AKQ为研究对象,通过体内、体外实验结合网络药理学分析、代谢组学以及肠道菌群分析,期望达到以下研究目的:1.明确AKQ对CTX引起的正常与荷瘤小鼠的毒性反应是否具有减毒作用及减毒效应的主要靶器官。2.评估AKQ对CTX毒性代谢产物丙烯醛（ACR）诱导的H9c2心肌细胞损伤是否具有保护作用。3.探索AKQ在上述动物和细胞水平减轻CTX毒性的机制,为中医异病同治理论提供实验依据。方法:1.体内（动物）实验1:观察AKQ对CTX所致昆明小鼠毒性反应的影响。（1）昆明小鼠CTX中毒模型的建立:8周龄,体重25±3g的健康昆明小鼠CTX连续4天腹腔注射给药:第1、2天100 mg/kg/d,第3、4天50 mg/kg/d。（2）分组处理及一般状况观察:健康昆明小鼠24只,随机分为3组,每组8只:正常对照组（第1-4天生理盐水0.3 mL/次/d腹腔注射+第1-7天纯水0.3 mL/次/d灌胃）,模型组（第1-4天CTX注射造模+第1-7天纯水灌胃0.3 mL/次/d）,艾可清组（第1-4天CTX注射造模+第1-7天AKQ灌胃1.3 g/kg/d）,实验周期8天,每日观察并记录各组小鼠一般状况及死亡数。艾可清给予小鼠1.3 g/kg/d相当于人临床剂量的9倍。（3）血液及生化指标的测定:实验结束后处死各组小鼠,取全血及血清,血细胞分析仪及生化分析仪检测WBC、RBC、PLT、HGB、LYM、MON、AST、ALT、CRE、CK。（4）主要脏器组织病理学观察:实验结束后处死各组小鼠,取各组小鼠心、肝、脾、肺、肾组织进行HE染色并观察。2.体内（动物）实验2:观察AKQ对CTX中毒小鼠心脏毒性的影响（1）CTX中毒小鼠心脏毒性模型的建立及分组:8周龄,体重25±3 g的健康昆明小鼠50只,随机分为5组,每组10只,CTX连续4天（第8-11天）腹腔注射造模（方案同体内实验1）。动物分组为正常组（第8-11天N.S 0.3 mL/次/d腹腔注射+第1-13天纯水0.3 mL/次/d灌胃）,模型组（第8-11天CTX注射造模+第1-13天纯水灌胃0.3 mL/次/d）,艾可清低剂量组（第8-11天CTX腹腔注射+第1-13天AKQ灌胃0.65 g/kg/d）,艾可清中剂量组（第8-11天CTX腹腔注射+第1-13天AKQ灌胃1.3g/kg/d）,艾可清高剂量组（第8-11天CTX腹腔注射+第1-13天AKQ灌胃2.6 g/kg/d）,实验周期14天,14天后取血清及心脏,进行相关检测。艾可清给予小鼠低、中、高剂量相当于人临床剂量的4.5、9、18倍。（2）心脏指数的测定:各组小鼠取心脏称重,计算心脏指数。（3）心肌酶及氧化指标的测定:各组小鼠取血清检测CK、CK-MB、GSH、SOD、MDA。（4）心脏的组织病理学观察:取各组小鼠心脏组织进行HE染色并观察。（5）心脏组织凋亡检测:Western blot检测各组小鼠心脏组织中Bax及Bcl-2的表达。3.体外（细胞）实验:观察AKQ对ACR诱导的H9c2毒性损伤的影响及机制探索（1）AKQ对H9c2活力影响的观察:AKQ颗粒甲醇提取物,加DMSO溶解,加细胞培养基稀释,配成不同浓度梯度,加入H9c2培养液,共孵育24、48及72小时,CCK8法测定细胞活力。（2）ACR对H9c2 IC50测定:将不同浓度梯度ACR溶液加入H9c2培养液培养,24小时后CCK8法测定细胞活力。（3）AKQ对ACR诱导的H9c2毒性损伤影响的观察:H9c2细胞分5组:对照组（正常培养）,ACR组（ACR 20μmol/L干预培养）,ACR+AKQ低剂量组（ACR+AKQ 20μg/mL）,ACR+AKQ 中剂量组（ACR+AKQ 40 μg/mL）,ACR+AKQ 高剂量组（ACR+AKQ 80 μg/mL）。培养24小时后观察细胞形态,进行CCK8检测、Hochest染色、流式Annexin V-FITC/PI双染及WB检测bax、Caspase3、Caspase9及bcl-2表达。（4）AKQ缓解CTX心脏毒性的网络药理学分析:进行CTX心脏毒性相关疾病靶点及AKQ药物成分治病靶点筛选并映射,构建药物-成分-靶点网络及PPI网络,对靶点进行GO分析和KEGG通路富集分析。（5）网络药理学分析的实验验证:用RT-qPCR及WB技术验证网络药理学分析富集的通路靶点表达水平。（6）AKQ对ACR诱导的H9c2毒性损伤机制的探索:H9c2细胞分4组:对照组（正常培养）,ACR组（ACR20 μmol/L干预培养）,ACR+AKQ组（ACR+AKQ 80μg/mL）,AKQ+LY294002 组（ACR+AKQ 80 μg/mL+LY294002 10 μmol/L）。培养 24小时后RT-qPCR及WB检测相关通路蛋白及凋亡蛋白的表达。4.体内（动物）实验3:AKQ对CTX化疗的荷瘤小鼠心脏毒性的影响及机制研究（1）荷瘤小鼠模型的建立:将密度为1× 107个/mL的S180肉瘤细胞悬液以0.2 mL/只的体积皮下接种于昆明小鼠后颈部。（2）动物分组及处理:将肿瘤体积范围为40-100 mm3的S180荷瘤小鼠24只随机分为3组,每组8只:肿瘤模型对照组（第1-13天纯水0.3 mL/次/d灌胃+第8-11天连续N.S 0.3 mL/次/d腹腔注射）,CTX单独化疗组（第8-11天连续CTX腹腔注射,CTX注射方案同前+第1-13天纯水灌胃0.3mL/次/d）,CTX化疗联合AKQ治疗组（第8-11天CTX连续腹腔注射+第1-13天艾可清2.6g/kg/d灌胃）。实验周期14天,第12天收集新鲜粪便,第14天取血清及心脏,进行后续检测。（3）心肌酶及氧化指标的测定:各组小鼠取血清检测CK、CK-MB、SOD、MDA。（4）心脏组织病理学观察:取各组小鼠心脏组织进行HE染色并观察。（5）心脏凋亡相关蛋白检测:WB检测各组小鼠心脏组织bax及bcl-2。（6）心脏通路蛋白检测:WB及免疫组化检测各组小鼠心脏组织相关通路靶点蛋白表达。（7）荷瘤小鼠瘤体重量测定:实验结束后取各组小鼠瘤体称重。（8）荷瘤小鼠血清代谢组学研究:各组小鼠取血清做GC/MS非靶向代谢组学分析。（9）荷瘤小鼠肠道菌群分析:接取小鼠新鲜未污染粪便做肠道菌群16SrRNA测序分析。结果:1.昆明小鼠腹腔注射环磷酰胺（100 mg/kg/d×2d,50 mg/kg/d×2d）后可见活动减少,畏寒蜷缩,毛发蓬松、竖立,进食减少,体重减轻等明显的中毒症状,加服AKQ后,上述中毒症状减轻,且死亡率较模型组明显下降（P=0.0028）。昆明小鼠予环磷酰胺注射后白细胞、血小板及淋巴细胞可出现显着减少（P<0.001,P<0.001,P<0.01）,而红细胞、血红蛋白及单核细胞无明显变化;AST、ALT及CRE无明显改变,CK出现显着上升（P<0.05）,加服AKQ 口服后,CK上升情况较模型组明显缓解（P<0.05）,其他血液生化指标比较无显着性差异。HE染色显示各组小鼠肝、脾、肺、肾组织病理改变无明显差异;模型组可见明显心肌损伤改变,加服AKQ后心肌病变程度减轻。2.昆明小鼠腹腔注射环磷酰胺（100 mg/kg/d ×2d,50 mg/kg/d×2d）后心脏指数较正常组明显增大（P<0.05）,AKQ低、中、高剂量组心脏指数较模型组均有显着性减小（P<0.05,P<0.01,P<0.01）。模型组CK-MB、MDA较正常组显着升高（P<0.001,P<0.001）,GSH 及 SOD 明显降低（P<0.05,P<0.001）,加服 AKQ 后,AKQ 各剂量组上述指标得到不同程度改善,其中以高剂量组改善最明显,高剂量组CK、CK-MB、MDA较模型组均显着下降（P<0.05,P<0.001,P<0.001）,而GSH及SOD明显上升（P<0.05,P<0.001）。模型组心脏HE染色可见明显心肌损伤改变,艾可清低、中、高剂量组心肌病变程度较模型组依次减轻。与正常组比较,模型组小鼠心脏组织中Bax表达增强,Bcl-2的表达减弱,AKQ各剂量组Bax表达与模型组相比呈剂量依赖性减弱,Bcl-2的表达呈剂量依赖性增强。3.AKQ醇提物在0-80 μg/mL浓度范围呈浓度依赖性促进H9c2细胞的增殖,ACR对H9c2细胞24小时IC50为20.37 μM。ACR作用于H9c2细胞24小时,引起的细胞损伤涉及:形态改变、细胞活力下降、Hochest染色阳性数目增多、流式Annexin V-FITC/PI双阳性细胞比例增加,凋亡蛋白Bax、Caspase3、Caspase9表达增强及抗凋亡蛋白Bcl-2表达减弱。H9c2细胞予AKQ处理后,与模型组相比,可剂量依赖性地改善H9c2细胞损伤形态、增强细胞活力、减少Hochest染色阳性及Annexin V-FITC/PI双阳性细胞比例,抑制Bax、Caspase3、Caspase9表达而增强Bcl-2表达。网络药理学分析结果显示:通过靶点筛选及映射得到192个靶点为AKQ主要成分治疗CTX心脏毒性损伤的作用靶点;通过构建AKQ药物-活性化合物-治病靶点网络图,得到15个关键化合物（包括等槲皮素、木犀草素、山奈酚、丹参酮Ⅱa、柚皮素等）;通过构建PPI网络得到30个核心靶点;GO分析显示靶点涉及的生物学功能主要包括调控细胞增殖/凋亡过程及氧化/炎症反应等。KEGG通路富集分析显示排名前10的信号通路涉及PI3K-AKT、TNF及MAPK通路。RT-qPCR显示上述3条通路关键靶点中的PI3K及AKT在AKQ组中表达较ACR组显着上调（P<0.001）,WB实验也观察到PI3K及AKT总蛋白及磷酸化蛋白水平均显着高于ACR组。AKQ+ACR组加入抑制剂LY294002后,上调的PI3K及AKT mRNA及蛋白水平被逆转;AKQ+ACR组较ACR组中上调的bax、Caspase3、Caspase9及下调的bcl-2同样被逆转。4.以密度为1×107个/mL的S180肉瘤细胞悬液,按0.2mL/只皮下接种于昆明小鼠后颈部,约6天后可成模。CTX单独化疗组CK-MB、MDA较肿瘤模型对照组显着升高（P<0.001,P<0.001）,SOD明显降低（P<0.001）,CTX化疗联合AKQ治疗组CK、CK-MB、MDA较CTX单独化疗组显着下降（P<0.01,P<0.001,P<0.001）,而SOD明显上升（P<0.001）。CTX单独化疗组心脏HE染色可见显着的心肌损伤,CTX化疗联合AKQ治疗组心肌病变程度较CTX单独化疗组明显减轻。与肿瘤模型对照组相比,CTX单独化疗组小鼠心脏组织Bax表达上调,Bcl-2、PI3K及AKT表达下调,加服AKQ后,Bax表达减弱,Bcl-2、PI3K及AKT表达增强。实验结束后,CTX化疗联合AKQ治疗组瘤体重量较单独化疗组显着减轻（P<0.05）。血清代谢组学分析在三组间共鉴定出44个差异代谢产物,AKQ干预能使CTX化疗改变的L-谷氨酸、L-天冬氨酸、柠檬酸、甘氨酸、鸟氨酸等代谢物轮廓向肿瘤模型对照组靠近;CTX联合AKQ治疗后显着增强的代谢通路包括:柠檬酸循环、精氨酸生物合成、丙氨酸天冬氨酸和谷氨酸代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、氨酰tRNA生物合成、谷胱甘肽代谢、组氨酸代谢、D-谷氨酰胺与D-谷氨酸代谢。肠道菌群分析显示CTX单独化疗组鞘氨醇单胞菌（Sphingomonadales）、溶杆菌（Lysobacter）相对丰度下调,普雷沃菌9（Prevotella9）上调,CTX 化疗联合 AKQ 治疗后,Sphingomonadales及Lysobacter 丰度上调,Prevotella9丰度下调。CTX单独化疗组中显着下调的p53信号通路、倍半萜生物合成、胆汁分泌及咖啡因代谢等通路,在AKQ干预后重新被显着上调。结论:1.AKQ能改善CTX引起的昆明小鼠中毒症状,显着降低死亡率;AKQ能降低CTX引起的心肌酶异常升高,减轻氧化应激失衡、减少心肌细胞凋亡,改善CTX诱导的心脏病理形态改变。2.AKQ能促进H9c2心肌细胞增殖,激活PI3K/AKT通路而减少ACR诱导的H9c2凋亡。3.荷瘤小鼠CTX化疗可引起心肌酶异常升高、氧化应激失衡、心肌细胞凋亡增加及PI3K/AKT表达下调,联用AKQ能改善上述病变,且能增强CTX抑瘤效果。4.AKQ可调节CTX化疗的荷瘤小鼠L-谷氨酸、L-天冬氨酸、柠檬酸、甘氨酸、鸟氨酸等44种差异代谢物表达,增强TCA循环,精氨酸生物合成,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢等16条代谢通路功能;上调有益菌（目水平Sphingomonadales、属水平Lysobacter）,下调有害菌（属水平Prevotella 9）丰度,增强肠道菌p53信号通路、胆汁分泌等功能从而发挥减轻CTX心脏毒性的作用。
杜肖[2]（2020）在《白英总碱抗NSCLC的物质基础和作用机制及临床前安全性研究》文中研究指明非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）是人类健康的主要威胁之一,免疫治疗和靶向治疗是近年来NSCLC治疗药物的重要研发方向。肿瘤来源外泌体（Tumor-derived exosomes,TEXs）可促进肿瘤的侵袭、转移、血管新生和免疫逃逸等,也是肿瘤领域的研究热点。TEXs的生物合成和功能发挥与细胞膜脂筏有着紧密的联系。中药白英（Solanum lyratum Thunb.）作为传统抗癌中药,有清热解毒和利湿消肿之效,在临床上被广泛用于治疗各种肿瘤。白英富含多类化学成分,其所含的生物碱组分具有优良的抗肿瘤药效。本课题组前期提取所得的白英总生物碱（total alkaloids from Solanum lvratum,TAS）具有显着的抗NSCLC药效,药理研究表明TAS具有抑制肿瘤血管新生的作用。前期研究阐明了 TAS中含有多种甾体生物碱化合物,并证明了 TAS所含甾体生物碱化合物具有凝集肿瘤血管内皮细胞（tumor-derived vascular endothelial cells,Td-ECs）细胞膜脂筏胆固醇,干扰脂筏形态及功能的作用。本论文的研究目的旨在前期研究的基础上,对TAS的抗肿瘤作用及其物质基础做出进一步的研究,并结合TEXs与细胞膜脂筏间所存在的紧密联系,从体内外两方面研究白英甾体生物碱对TEXs的影响。鉴于皂苷与甾体生物碱类似,均具有与胆固醇结合的性质,和破坏脂筏完整性的活性,我们提出了“甾体糖苷生物碱和皂苷类化合物能够通过破坏细胞膜脂筏结构的完整性影响肿瘤外泌体的生成和功能”的假说。本论文以人参皂苷Rg3为例,对皂苷影响TEXs的生成和功能进行了初步研究,以期对所提假说进行初步验证。此外,本课题组前期以TAS为原料研制了抗肿瘤中药新药安特逍胶囊（antexiao capsule,AtxC）,本论文对AtxC的临床前安全性进行了系统的研究,旨在为AtxC的开发应用提供安全性数据。本论文的主要研究方法如下:1.本论文采用多种色谱技术对TAS的化学成分进行了分离纯化,并采用质谱、一维和二维核磁等波谱技术,对分离所得到的单体化合物的结构进行了鉴定。2.为研究TAS及其化学成分的抗肿瘤活性,本论文采用MTT法,检测分离所得到的白英单体化合物1-7、11-13对Td-ECs细胞增殖的影响;采用划痕愈合实验,考察化合物1-7、11-13对Td-ECs细胞血管新生的抑制作用;以鼠源S180肉瘤细胞小鼠移植瘤模型,考察TAS大极性部位（TASG）和小极性部位（TASS）以50、100、200mg·kg-1作为低（L）、中（M）、高（H）剂量组连续灌胃给药10 d对荷瘤小鼠的抑瘤效果,以TAS和环磷酰胺（CTX）作为阳性药,并对荷瘤小鼠的胸腺和脾脏指数进行检测,以ELISA法检测TAS组荷瘤小鼠血清细胞因子IL-6、TGF-β和IFN-y的水平,考察TAS对荷瘤小鼠免疫调节的作用。3.为考察白英生物碱和人参皂苷Rg3对肿瘤的抑制作用是否与TEXs有关,本论文采用外泌体分离试剂盒和超速离心法分离A549细胞来源的外泌体,以Western Blotting法和透射电镜检测,以及纳米粒度分析技术鉴定所分离TEXs;以体外划痕愈合实验、管腔形成实验和Transwell小室侵袭实验,检测A549细胞外泌体对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）的血管新生的影响;以MTT实验检测了 TAS和白英生物碱SA1及人参皂苷Rg3对A549细胞的增殖抑制作用;以LDH漏出实验检测白英生物碱SAl和人参皂苷Rg3对A549细胞膜完整性的影响;以终浓度为10 μg·mL-1的TAS,终浓度为10 μM的SA1和终浓度为100μM的人参皂苷Rg3干预A549细胞48 h后,检测外泌体粒度,并以分离所得的A549细胞外泌体作用于HUVECs,考察白英生物碱和皂苷干预后的A549细胞所分泌的TEXs对HUVECs血管新生的影响;采用蛋白质组学检测SA1干预与未干预A549细胞及其所分泌的TEXs中的蛋白质组变化;以BALB/c裸鼠构建A549细胞裸鼠移植瘤模型,分别以A549细胞外泌体（Control exosome）和SA1干预的A549细胞所分泌TEXs（SA1 exosome）以100 μg/只剂量,采用瘤内注射方式给予A549荷瘤裸鼠,保持一周2次给药频率,以紫杉醇为阳性药（Taxol,8 mg·kg-1,腹腔注射）,并设置溶媒对照组（Model）,动态观测肿瘤生长状态,给药时长28 d,实验结束后处死动物,剥取瘤块,称重,计算抑瘤率,考察SA1干预与未干预的A549细胞所分泌的TEXs在体内对肿瘤生长的影响。4.为了考察AtxC的临床前安全性,本论文采用单次灌胃给予小鼠和Beagle犬AtxC内容物,观察其对小鼠的协调运动、自主活动和阈下剂量戊巴比妥钠致催眠作用的影响,及其对Beagle犬心电图指标、血压和呼吸指标的影响;采用单次灌胃给予大鼠和Beagle犬AtxC内容物,观察动物的体重、摄食、心电等指标,考察AtxC的急性毒性反应;采用重复灌胃大鼠26周和Beagle犬39周AtxC内容物,观察动物的体重、心电和临床病理学检查等指标,考察AtxC的长期毒性反应。本论文的主要研究结果如下:1.共分离鉴定出14种甾体糖苷生物碱,其中新化合物12个,分别为:（3β,5α,20S,22S,23R,25S）-16,22-epoxy-23,26-imino-cholestan-3-ylO-β-D-glucopyran osyl-（1→2）-O-β-D-glucopyranosyl-（1→4）-β-D-galactopyranoside（1）,（3β,20S,22S,23R,25S）-16,22-epoxy-23,26-imino-cholestan-5-en-3-ylO-β-D-glucopyranosyl-（1→2）-O-β-D-glucopyranosyl-（1→4）-β-D-galactopyranoside（2）,16,23-epoxy-22,26-imino-cholestan-5,22（N）,23,25（26）-tetraene-3β-ol-3-0-β-D-glucopyranosyl-（1→2）-β-D-gluc opyranosyl-（1→4）-β-D-galactopyranoside（3）,（3β,25R）-16,23-epoxy-23,24-imino-cholestan-5,16,20,23（N）-tetraene-3β-ol-3-O-β-D-glucopyranosyl-（1→2）-β-D-glucopy ranosyl-（1→4）-β-D-galactopyranoside（4）,（3β,5α,25R）-16,23-epoxy-23,24-imino-cholestan-16,20,23（N）-triene-3β-ol-3-O-β-D-glucopyranosyl-（1→2）-β-D-glucopyrano syl-（1→4）-β-D-galactopyranoside（5）,15β-hydroxyl-（3β,5α,25R）-16,23-epoxy-23,24-imino-cholestan-16,20,23（N）-triene-3β-ol-3-O-β-D-glucopyranosyl-（1→）-β-D-gluco pyranosy l-（1→4）-β-D-galactopyranoside（6）,1 5β-hydroxy l-（3β,25β）-16,23-epoxy-23,24-imino-cholestan-5,16,20,23（N）-tetraene-3β-ol-3-O-β-D-glucopyranosyl-（1→2）-β-D-glucopyranosyl-（1→4）-β-D-galactopyranoside（7）,15β-ethoxy-（3β,25R）-16,23-epoxy-23,24-imino-cholestan-5,16,20,23（N）-tetraene-3β-ol-3-O-β-D-glucopyranosyl-（1→2）-β-D-glucopyranosyl-（1→4）-β-D-galactopyranoside（8）,15β-ethoxy-（3β,5α,25R）-16,23-epoxy-23,24-imino-cholestan-16,20,23（N）-triene-3β-ol-3-O-β-D-glucopyr anosyl-（1→2）-β-D-glucopyranosyl-（1→4）-β-D-galactopyranoside（9）,15β-hydroxyl-（3β,5α,25R）-16,23-epoxy-23,24-imino-cholestan-16,20,23（N）-triene-3β-ol-3-O-β-D-g lucopyranosyl-（1→4）-β-D-galactopyranoside（10）,（3β,1 6R,20R,22α,25R）-spirosolan-5-en-3-ylO-β-D-glucopyranosyl-（1→2）-O-βD-glucopyranosyl-（1→4）-β-D-galactopy ranoside（11）,（3β,5α,16R,20R,22α,25R）-spirosolan-3-ylO-β-D-glucopyranosyl-（1→2）-O-β-D-glucopyranosyl-（1→4）-β-D-galactopyranoside（12）;分离所得两种已知化合物分别为:16,23-epoxy-22,26-imino-cholest-22（N）,23,25（26）-trien-3β-ol-3-O-β-D-glucopyranosyl-（1→2）-β-D-glucopyranosyl-（1→4）-β-D-galactopyranoside（13）,（3β,22α,25R）-spirosolan-5-en-3-ylO-β-D-glucopyranosyl-（1→2）-O-β-D-glucopyranos yl-（1→4）-β-D-galactopyranoside（14,SA1）。2.化合物1-7、11-13以最高100 μM浓度干预Td-ECs细胞48 h时,对细胞的抑制率均未达50%;化合物1-6、11-13作用浓度为25 μM时,可显着抑制Td-ECs细胞的划痕愈合（P<0.05）,血管内皮细胞生长因子（VEGF）显着促进了 Td-ECs细胞的划痕愈合（P<0.05）,化合物1-7、11-13均可剂量依赖地抑制VEGF诱导的Td-ECs细胞的划痕愈合能力（P<0.05）;TASS-L组、TASG-H剂量组和TAS组的抑瘤率较高,分别为39.71%、43.92%和42.13%;与模型组相比,CTX组S180荷瘤小鼠的胸腺和脾脏均指数显着降低（P<0.01）,白英生物碱各给药组,除大极性高剂量组外,动物的脾脏指数均明显升高,其中TASS-L和TASS-H组动物脾脏指数显着升高（P<0.01,P<0.05）;与CTX组相比,TASS-M、TASS-H和TASG-H组荷瘤小鼠的胸腺指数及白英生物碱各给药组动物的脾脏指数均显着升高;与模型组和CTX组相比,TAS组荷瘤动物血清中的IFN-y水平显着升高（P<0.05）。上述结果说明,TAS及其大极性和小极性部位均可抑制小鼠S180移植瘤的生长,且具有提高荷瘤小鼠免疫功能的作用。3.SA1和人参皂苷Rg3虽然对A549细胞的增殖抑制作用弱,但对A549细胞膜完整性具有破坏作用,可剂量依赖地升高A549细胞的LDH漏出率（P<0.05）;分离所得的A549细胞外泌体呈圆形或椭圆形膜囊泡形态,随着培养时间的延长,细胞所分泌TEXs的直径出现增加,TEXs中标记蛋白CD9、CD63的表达均呈阳性;与空白对照组相比,Control exosome显着促进了 HUVECs细胞的划痕愈合（P<0.01）;与空白对照组和Control exosome组相比,TAS和SA1干预后A549细胞所分泌TEXs显着抑制了 HUVECs的划痕愈合及A549细胞所分泌TEXs的促HUVECs划痕愈合作用（P<0.01）,TAS、SA1及Rg3干预后A549细胞所分泌TEXs显着抑制了 HUVECs的管腔形成能力和侵袭能力;药物干预与未干预的A549细胞所产生的TEXs的粒径集中在60-90 nm,TAS、SA1和Rg3干预后A549细胞上清中TEXs浓度较未干预时分别增加了 10、3.8和3.7倍;蛋白质组学结果显示SA1干预与未干预的A549细胞间存在1154个差异蛋白,有Poly（A）RNA结合等功能,参与翻译、rRNA的加工等生物过程,SA1干预与未干预的A549细胞TEXs间存在746个差异蛋白,差异蛋白具有Poly（A）RNA结合、蛋白结合等功能,参与了细胞间粘附、mRNA剪接等生物过程;蛋白质组学所检测差异蛋白共富集到40多种代谢通路,参与500多个信号通路和20多个蛋白-蛋白作用网络,为后续研究提供了多种作用靶点和蛋白通路;与模型组和Control exosome组相比,SA1 exosome对荷瘤动物的肿瘤体积和瘤重均有显着降低作用（P<0.01）,抑瘤率为70.48%,Control exosome较模型组相比,对肿瘤生长也显示出一定抑制作用。4.单次灌胃给予AtxC除800 mg·kg-1剂量下可增加小鼠戊巴比妥钠阈下剂量入睡率（P<0.01）外,对小鼠的自主活动和协调运动均无影响,也不影响Beagle犬的心电、血压、呼吸等指标;AtxC单次灌胃大鼠最大耐受量为4.0 g·kg-1,Beagle犬的最大耐受量大于6.0 g·kg-1,16.0 g·kg-1单次灌胃可致大鼠体重及摄食减少（P<0.05）;AtxC重复灌胃大鼠的最大耐受量为0.8 g·kg-1,Beagle犬的最大耐受剂量为320 mg·kg-1,AtxC以2.0 g·kg-1剂量重复灌胃大鼠可造成动物胃组织发生病变,AtxC以800 mg·kg-1剂量重复灌胃Beagle犬可显着降低动物体重和血清TP、GLOB 和 ALB 等指标（P<0.05）。通过上述研究,本论文得到了以下几点研究结论:（1）本论文从TAS中分离得到12种新甾体糖苷生物碱化合物,证明了分离所得的大多数白英单体生物碱均具有体外抑制肿瘤血管新生的活性,并证明了 TAS有增强S180荷瘤小鼠免疫功能的作用,对TAS的抗肿瘤作用及其物质基础有了进一步的认识;（2）证明了 A549细胞外泌体在体外可促进HUVECs血管新生,而TAS、SA1和Rg3的干预使A549细胞所分泌TEXs有了显着体外血管新生抑制活性,并且可增加TEXs的分泌量,SA1的干预还增加了 A549细胞所分泌TEXs的体内抗肿瘤活性,SA1对TEXs的作用与其能够改变A549细胞及其TEXs的蛋白质组表达有关;（3）初步验证了“甾体糖苷生物碱和皂苷类化合物能够通过破坏细胞膜脂筏结构的完整性影响肿瘤外泌体的生成和功能”的假说,为甾体糖苷生物碱和皂苷类化合物的抗肿瘤研究提供了新的研究思路;（4）证明了以TAS为原料的抗肿瘤中药新药AtxC 口服应用具有良好的安全性。
徐小净[3]（2019）在《荸荠皮和浒苔的化学成分及其抗肿瘤、抗菌活性研究》文中认为具有优良药用价值的可食用植物是一类重要的生物资源,在我国的应用历史悠久。对其化学成分和营养成分的研究对充分开发利用这些宝贵资源具有重要的意义。本文选取莎草科荸荠属植物荸荠（HHeleocharis dulcis（Burm.f.）Trin）皮和绿藻门石莼科植物浒苔（Enteromorpha prolifera）作为研究对象,采用多种分离手段从荸荠果皮和浒苔两种植物中分离得到了 28个化合物,通过现代波谱学手段（红外光谱、质谱、核磁共振等）结合它们的理化性质,鉴定了全部28个化合物的结构。其中从荸荠皮中分离得到了 20个化合物:β-谷甾醇（B1）、16-三十一酮（B2）、白桦酯酸（B3）、β-胡萝卜苷（B4）、pheno1,2,4-bis（1,1-dimethylethyl）-,1,1’,1"-phosphite（B5）、（3ββ）-Lup-20（29）-ene-3,30-diol（B6）、肉桂酸（B7）、桦木醇（B8）、阿魏酸（B9）、n-tetratriacont-20,23-dienoic acid（B10）、对香豆酸（B11）、山奈酚（B12）、槲皮素（B13）、绿原酸（B14）、17-33 ketones（B15）、咖啡酸（B16）、芦丁（B17）、香豆素（B18）、对羟基苯甲酸（B19）、正丁基-β-D-呋喃果糖苷（B20）。从浒苔中分离得到了 8个化合物:β-谷甾醇（H1）、α-生育酚（H2）、对羟基苯甲酸乙酯（H3）、2’-脱氧尿嘧啶核苷（H4）、腺嘌呤（H5）、棕榈酸（H6）、balansenateⅡ（H7）、反式植醇（H8）。其中 B2、B5、B6、B8、B10、B15、B20、H3、H4、H6、H7、H8为首次从这两种植物中分离得到。MTT法肿瘤细胞增殖实验结果表明化合物B15对MGC-803、SKOV3、T24细胞均显示出良好的抑制能力,其IC50值分别达到20.02、25.65、10.20 μM,抑制能力均强于阳性对照5-Fu。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术、Hoechst 33258荧光染色、AO/EB染色、线粒体跨膜电位ΔΨm检测、Western blot蛋白印记分析和ROS测定等一系列生化实验结果证明B15可以特异性诱导T24凋亡,提高细胞内ROS的水平,引起线粒体跨膜电位下降,并确定凋亡通路为线粒体途径。本文通过微量肉汤稀释法同时研究了部分化合物的抗菌能力,结果表明,受试化合物对大肠杆菌均有抑制作用,其MIC（μg/mL）值在32～128之间;B12、B16对金黄色葡萄球菌抑制作用较强,其MIC（μg/mL）值分别为16、32;B14、B16、B19、H2、H4、H8对枯草芽孢杆菌抑制作用较强,其MIC（μg/mL）值分别为32、32、32、32、16、32;对绿脓杆菌抑制作用较强的有B3、B9、B12、B16、H2、H3,其MIC（μg/mL）值分别为 32、32、32、16、16、32。论文还研究了荸荠皮的营养成分,研究发现荸荠皮含有丰富的粗纤维、多种矿物元素以及多种氨基酸。论文对荸荠皮和浒苔的化学成分研究,丰富了可食用植物在天然药物研究中的范畴,减少了资源浪费与生态环境污染,研究结果为进一步开发利用可食用植物的药用价值与保健作用提供了一定的理论指导。
覃明雄,陈洪涛,蔡丹昭,刘源焕,罗宇东,李芳婵[4]（2019）在《复方白花蛇舌草胶囊抗肿瘤作用的初步研究》文中进行了进一步梳理目的:研究复方白花蛇舌草胶囊的抗肿瘤作用。方法:制备复方白花蛇舌草胶囊含药血清,观察其对体外培养的HepG2、BEL-7402肿瘤细胞克隆、增殖能力的影响,及对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。建立H22和S180荷瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤实验,小鼠随机分为荷瘤对照组、氟尿嘧啶组及复方白花蛇舌草胶囊高、中、低剂量组,连续灌胃给药7 d后,观察复方白花蛇舌草胶囊对荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果:复方白花蛇舌草胶囊高剂量含药血清可有效抑制HepG2、BEL-7402细胞的克隆形成能力,提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,与空白对照组比较有显着性差异（P<0.05或P<0.01）。复方白花蛇舌草胶囊高、中剂量组对H22荷瘤小鼠具有明显的抑瘤作用（P<0.05）。结论:复方白花蛇舌草胶囊具有一定的抗肿瘤作用。
孟庆龙[5]（2018）在《长白山刺五加多糖开发的药理基础研究》文中认为中药刺五加为五加科（Araliaceae）五加属（Acanthopanax）植物刺五加（Acanthopanax senticosus（Rupr.Et Maxim.）Harms）的干燥根和根茎或茎。近年来,刺五加化学成分和药理作用的研究热点主要集中在皂苷类和黄酮类化合物上,且在心脑血管疾病的临床治疗中已得到了较为广泛的应用。刺五加多糖作为刺五加的重要活性成分之一,由于多糖类成分纯化过程十分繁琐,纯化工艺复杂,纯度不理想等因素限制了刺五加多糖在组分、构效关系以及作用机制等方面的确证。本试验通过对长白山刺五加多糖（ASPS）化学组分的分析,并对其抗炎作用、镇痛作用、药物性肝损伤保护作用、结核性胸膜炎辅助治疗作用、抗肿瘤作用、延缓衰老作用以及提高学习记忆能力作用的深入研究,同时对长白山刺五加多糖胶囊的制备工艺进行了探讨,以期为刺五加多糖的临床应用开发提供有利参考。试验结果如下:1.本试验通过对长白山刺五加多糖的提取和分离,并采用高效液相色谱法和气相色谱法对其化学成分进行分析。结果表明,经提取分离分析,刺五加苷E得率为93.1%;ASPS得率为96.7%,相对分子量为10KD。经高效液相色谱分析,ASPS具有均匀对称单一峰,表明其纯度、极性及均一性均较好。经气相色谱分析,其单糖组分为阿拉伯糖:木糖:葡萄糖:甘露糖,摩尔比为7.1:22.3:7.6:1.0。2.本试验以二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致小鼠足趾肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性提高以及棉球致小鼠肉芽肿为模型,对ASPS的抗炎作用进行了研究。试验结果表明,ASPS能够有效抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀,角叉菜胶致小鼠足趾肿胀,醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性提高以及棉球致小鼠肉芽肿。同时,对于不同抗炎模型,ASPS均能够有效改善小鼠免疫器官状况,对机体免疫细胞因子水平起到调节作用。3.本试验通过热刺激对痛阈值的影响和醋酸致扭体反应,对ASPS的镇痛作用进行了研究。试验结果表明,ASPS能够提高热刺激小鼠的痛阈值和镇痛率,降低醋酸致小鼠扭体反应的扭体次数,提高扭体反应抑制率。同时,对于不同镇痛模型,ASPS均能使得小鼠免疫器官状况得到明显改善,细胞因子水平得到有效调节。4.本试验以实验性结核小鼠为模型,对ASPS抗结核药物性肝损伤作用及其机制进行了研究。试验结果表明,ASPS对抗结核治疗的实验性结核小鼠表现出较好的保肝护肝效果,其机制可能是通过调节实验性结核小鼠血清细胞免疫因子水平和脾细胞T淋巴亚群免疫水平而提高实验性结核小鼠的免疫能力,进而实现其保肝护肝的作用。5.本试验以结核性胸膜炎大鼠为模型,对ASPS的治疗效果极其机制进行了研究。试验结果表明,ASPS能降低结核胸膜炎大鼠胸腔积液及胸膜厚度,并能够改善结核性胸膜炎大鼠胸腔积液白细胞计数及生化指标。另外,ASPS还能够改善和调节结核性胸膜炎大鼠的细胞免疫因子,这可能是其治疗结核性胸膜炎的作用机制之一。6.本试验以肉瘤S180、肝癌H22和宫颈癌U14小鼠实体瘤和腹水瘤为模型,对ASPS的抗肿瘤作用及其机制进行研究,并对其毒性进行考察。结果表明,ASPS对肉瘤S180、肝癌H22和宫颈癌U14荷瘤小鼠的实体瘤质量均具有较好的抑制作用,使得荷瘤小鼠的抑瘤率得到显着改善,同时还能够提高荷瘤小鼠的免疫器官指数,调节荷瘤小鼠的免疫细胞因子,从而提高机体免疫能力,增强其抗病能力。另外,ASPS还能够延长肉瘤S180、肝癌H22和宫颈癌U14腹水瘤小鼠的存活天数,积极改善其生命延长率。急性毒性试验结果表明,ASPS属实际无毒物级物质。7.本试验以D-半乳糖所致衰老小鼠为模型,对ASPS延缓衰老作用及其机制进行研究。结果表明,ASPS能够有效提高D-半乳糖所致衰老小鼠体质量和肝脏指数,使得机体状况得到改善;还能够有效提高模型小鼠血清、脑、肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性、过氧化氢酶（CAT）活性,而降低血清、脑、肝组织中丙二醛（MDA）含量,进一步证实了ASPS在增强机体抗氧化酶活性的同时,降低了脂质过氧化对细胞的损伤,从而起到了延缓衰老的作用。8.本试验以东莨菪碱所致急性记忆障碍大鼠为模型,采用避暗实验和Morris水迷宫实验对ASPS增强记忆能力及其机制进行研究。结果表明,在避暗实验中,ASPS能够有效延长记忆障碍大鼠的避暗潜伏期和明箱停留时间,减少避暗错误次数;而在Morris水迷宫实验中,ASPS能够延长记忆障碍大鼠的避暗潜伏期和原平台停留时间,增多平台探索次数,同时还能有效提高模型大鼠脑组织和血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性、降低丙二醛（MDA）含量,并对中枢胆碱能系统的乙酰胆碱酯酶（AChE）活性和乙酰胆碱转移酶（ChAT）活性起到改善作用,从而起到增强学习记忆能力的作用。9.本试验通过辅料筛选、制粒工艺条件筛选、药粉成型性研究、胶囊制备以及胶囊制剂的检测等方面的考察,对ASPS胶囊制剂的工艺进行研究。试验结果表明,玉米粉更适合作为ASPS的辅料应用于胶囊剂型的制备。90%的乙醇浓度,1:1的料液比,60℃的干燥温度,1h的干燥时间可以使ASPS的颗粒外形和制粒效果呈现较好状态。在ASPS胶囊的生产和贮存过程中,应将相对湿度严格控制在62%以下以确保药粉的质量。ASPS胶囊内容物含水量为7.04%,平均内容物装量为0.4315g,平均崩解时限为17.43min,均符合《中国药典》（2015版）的相关规定。
刘凯[6]（2017）在《当归红芪超滤物辅助12C6+重离子束治疗肝癌减毒增效实验研究》文中认为目的:基于实验研究证明当归红芪超滤物辅助C重离子束治疗肝癌的减毒增效作用并对其可能机制进行探讨,为当归红芪超滤物辅助12C6+重离子束治癌的临床应用提供依据。方法:超高效液相色谱法和超高效液相色谱-质谱联用比较当归红芪超滤物与水提取物组分差异;基于Annexin V-FITC/PI双染、流式细胞仪、实时定量PCR阵列分析、激光共聚焦、蛋白印迹技术观察不同剂量的12C6+重离子束辐射诱导人肝癌Hep G2细胞的功效并对机制进行研究;原代体外培养小鼠H22肝癌细胞,构建H22肝癌荷瘤小鼠腹水瘤与实体瘤动物模型;基于血液白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血小板（PLT）数量及血红蛋白（HGB）含量检测,脾脏指数、胸腺指数测定,流式细胞仪技术血液T淋巴细胞亚群分析,ELISA法血清补体C3、IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4检测,骨髓涂片骨髓象分析,肺脏、心脏、肝脏、脾脏、肾脏HE染色病理形态学观察观察当归红芪超滤物对12C6+重离子束治疗H22荷瘤小鼠的减毒效应;基于肿瘤直径测量,小动物成像技术检测肿瘤面积,红外线成像系统检测H22荷瘤小鼠机体及肿瘤温度,肿瘤指数、抑瘤率测定,HE染色肿瘤组织病理形态学观察,电镜下肿瘤组织微观形态学,免疫组化法检测肿瘤组织TP53、Bax、Bcl-2、Survivin、VEGF的表达观察当归红芪超滤物对12C6+重离子束治疗H22荷瘤小鼠的增效效应;基于细胞凋亡检测、细胞周期分析、Mouse Genome 430 2.0芯片小鼠腹水细胞基因表达谱检测技术初步筛选当归红芪超滤物辅助12C6+重离子束治疗H22荷瘤小鼠减毒增效的可能分子机制。结果:（1）超高效液相色谱法和超高效液相色谱-质谱联用比较当归红芪超滤物与水提取物组分差异显示,当归红芪超滤物中组分少于当归红芪浸膏粉中组分,部分所具有的相同组分在超滤物中含量有一定提高;（2）12C6+重离子束6Gy剂量单次辐射人肝癌Hep G2细胞24小时后,与0 Gy剂量组比较,细胞晚期凋亡率、G2/M期细胞比例明显上升（P<0.01）,电子显微镜下显示了细胞凋亡及线粒体肿胀的表现,在此过程中p53信号通路涉及DNA损伤修复、凋亡、细胞周期调控、转录调节、血管新生等31个基因表达出现了明显变化;与0 Gy剂量组比较,6 Gy剂量12C6+重离子束辐射组细胞线粒体膜电位呈现崩解表现,细胞FAS、TP53BP2、TP53AIP1、CASP9蛋白高表达（P<0.01）;（3）小鼠H22肝癌细胞体外贴壁培养可以多次传代,体外悬浮培养生长时间在1周左右;用体外贴壁培养的小鼠H22肝癌细胞4×106个/m L的细胞悬液,每只小鼠直接腹腔注射1 m L后,成功构建H22肝癌荷瘤小鼠腹水瘤动物模型;用H22肝癌荷瘤腹水瘤小鼠腹水细胞,PBS调整细胞悬液浓度为4×107个/m L,每只小鼠右腋下皮下注射0.1 m L,成功构建H22肝癌荷瘤小鼠实体瘤模型,模型成功率达95%;（4）与肿瘤模型组比较,单纯放射组小鼠血液白细胞（WBC）、血小板（PLT）数量明显下降（P<0.01）,脾脏指数、胸腺指数明显下降（P<0.05）,血液CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞数量明显下降（P<0.01）,CD4+/CD8+比值明显异常（P<0.01）,血清IFN-γ、IL-4含量明显下降（P<0.05）,IFN-γ/IL-4比值明显异常（P<0.05）,骨髓象中性杆状核比例明显下降（P<0.01）,中性分叶核/中性杆状核比值明显异常（P<0.05）,中幼红、晚幼红比例及巨核细胞数量明显下降（P<0.05）,HE染色病理形态学观察显示12C6+重离子束辐射引起H22荷瘤小鼠肺脏、心脏、肝脏、脾脏、肾脏出现不同程度的损伤。与单纯放射组比较,药物+放射组小鼠血液白细胞（WBC）、血小板（PLT）数量,脾脏指数、胸腺指数,血液CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞数量,CD4+/CD8+比值,血清IFN-γ、IL-4含量、IFN-γ/IL-4比值,骨髓象中性杆状核比例、中性分叶核/中性杆状核比值、中幼红、晚幼红比例、巨核细胞数量均显示了一定程度的改善（P<0.05）,HE染色病理形态学观察显示当归红芪超滤物具有拮抗12C6+重离子束辐射引起的H22荷瘤小鼠肺脏、心脏、肝脏、脾脏、肾脏损伤的作用;（5）与肿瘤模型组比较,单纯药物组小鼠肿瘤面积明显缩小（P<0.05）,瘤体最高温度下降（P<0.05）,肿瘤指数下降（P<0.05）,病理形态学显示当归红芪超滤膜提取物具有降低肿瘤细胞分裂活性的作用,电镜下可观察到细胞凋亡,免疫组化结果显示其可以下调肿瘤组织Survivin及VEGF的表达。与肿瘤模型组比较,单纯放射组小鼠的肿瘤直径、肿瘤面积、肿瘤温度、肿瘤指数均显着下降（P<0.05）,病理形态学显示见坏死、异质性倾向等,电镜下细胞凋亡、坏死多见,免疫组化结果显示其早期可以下调肿瘤组织Bcl-2、Survivin的表达,上调Bax的表达。药物与12C6+重离子束放疗联合治疗H22肝癌荷瘤小鼠21天时抑瘤率为59.51%,Q21值=0.91,于治疗26天时抑瘤率为71.72%,Q26值=1.01;（6）单纯药物组/肿瘤模型组差异表达基因的PATHWAY分析结果显示:单纯药物组与肿瘤模型组相比,有230个基因表达上调,219个基因表达下调,差异表达基因富集在抗原处理和加工、p53信号通路、PI3K-Akt信号通路中,ATR、Cyclin E、Sestrins、Hsp70、RTK、Gβy、AMPK基因表达上调,MHCI、ECM基因表达下调;单纯放射组/肿瘤模型组差异表达基因的PATHWAY分析结果显示:单纯放射组与肿瘤模型组相比,有874个基因表达上调,445个基因表达下调,差异表达基因富集在结直肠癌信号通路、m TOR信号通路、AMPK信号通路以及趋化因子信号转导通路中,APC、β-catenin、TGF-βRⅡ、SMAD1、DCC、KRAS、Raf、Rac/Rho、c-Jun、c-Fos、p53、BAX、AMPK、BRAF、CREB、FOS、Rab、Rho A、IKK、h MLH1、h MSH1、h MSH3、h MSH6基因表达上调,而PKB、Cyclin D1、HIF-1α、ATG1、MO25、TSC1、WASP、S6、CXCR5、Gnai1基因表达下调;药物+放射组/肿瘤模型组差异表达基因的KEGG PATHWAY分析结果显示:药物+放射组与肿瘤模型组相比,有571个基因表达上调,410个基因表达下调,差异表达基因富集在p53信号通路、胶质瘤、细胞周期、m TOR信号通路、AMPK信号、肾细胞癌以及PI3K-Akt信号通路中,MDM-X、ATR、CHK1,2、Cyclin E、Siah、Sestrins、Bid、ATM、Hdac、Cyc E、CAM、P53、ORC、MCM、Bub3、PI3K、AMPK、Hu R、CPT1、PDGFβ、EGFR、FH、Gβy、ECM、BHD、AMPK、RTK、Cyclin、IKK、MET、VHL基因表达上调,而PKB、HNF-4α、HIF-1α、CUL2、IGFR、PAK、TSC1、S6K1/2、Rictor、Stag1/2、JAK、PTEN、TSP1基因表达下调;药物+放射组/肿瘤模型组差异表达基因的Gene Ontology富集分析显示主要在Gene Ontology数据库功能条目中有与免疫调节有关的Term中。结论:（1）超滤除去了当归红芪浸膏粉中分子量10 KDa以上的组分,当归红芪超滤物中组分少于当归红芪浸膏粉中组分;（2）6 Gy剂量12C6+重离子束辐射人肝癌Hep G2细胞明显诱导细胞凋亡及细胞G2/M期阻滞,在此过程中细胞内p53信号通路上与DNA损伤修复、凋亡、周期调控、转移、恶化、辐射抵抗相关的系列基因表达出现了特征性变化,其诱导凋亡的机制是内源性与外源性途径共同作用的结果,野生型p53基因参与了这一过程的调控,其抑癌功能的恢复,与ASPP2及TP53AIP1高表达相关;（3）小鼠H22肝癌细胞体外贴壁培养更加适合,本实验构建的H22肝癌荷瘤小鼠腹水瘤动物模型在8天内适合开展各种实验观测;构建的H22肝癌荷瘤小鼠实体瘤模型在造模后30天内开展实验是较理想的观测时间;（4）12C6+重离子束辐射会造成H22荷瘤小鼠免疫功能下降,骨髓抑制,肺脏、心脏、肝脏、脾脏、肾脏的受损,当归红芪超滤膜提取物具有抗12C6+重离子束辐射引起的H22肝癌荷瘤小鼠免疫功能下降,骨髓抑制,肺脏、心脏、肝脏、脾脏、肾脏受损的作用;（5）当归红芪超滤膜提取物单用具有抑制H22荷瘤小鼠肿瘤增长作用,12C6+重离子束放疗明显具有抑制H22荷瘤小鼠肿瘤增长作用,当归红芪超滤膜提取物联合12C6+重离子束放疗抗H22荷瘤小鼠肿瘤增长作用呈现相加作用,没有协同作用,其作用机制均与p53信号通路相关,但激活的具体靶点及时间点不同;（6）当归红芪超滤膜提取物单用起到了调节免疫功能,抗肿瘤、调控能量代谢的作用,其分子机制可能主要涉及抗原处理和加工、p53信号通路、PI3K-Akt信号通路;12C6+重离子束放疗可以起到明显的抗肿瘤作用,其分子机制可能主要涉及结直肠癌信号通路、m TOR信号通路、AMPK信号通路以及趋化因子信号转导通路,PKB（AKT）基因可能是放疗治疗的关键靶点;当归红芪超滤膜提取物辅助12C6+重离子束放疗可以达到减毒增效的目的,AMPK基因上调,与肿瘤辐射抵抗相关的DNA修复基因h MLH1、h MSH1、h MSH3、h MSH6下调,可能是分子机制的关键靶点,荷瘤鼠的免疫功能改善也是机制之一。
黄鑫,黎丽,何俊炜[7]（2017）在《壮药癌痛消胶囊干预肝癌（H22）荷瘤小鼠的实验研究》文中研究说明目的:研究癌痛消胶囊对肝癌（H22）荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用。方法:60只昆明（KM）小鼠进行H22实体瘤造模后随机分6组。连续给药干预12d后观察并记录H22荷瘤小鼠日常活动的影响,测定小鼠抑瘤率及计算脾脏、胸腺、肝脏重要脏器指数;检测小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）水平;检测H22荷瘤小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖功能。结果:癌痛消胶囊高、中、低剂量组和环磷酰胺给药组的抑瘤率分别为48%、32.7%、20.4%和41.8%,均具有明显的抑瘤作用（P<0.05）。给予癌痛消胶囊后小鼠血清中TNF-α、IFN-γ水平均显着增高（P<0.05）。癌痛消胶囊可显着促进H22荷瘤小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖。结论:癌痛消胶囊对肝癌（H22）荷瘤有明显的抑制作用,能显着提高免疫力。
关洁珊[8]（2016）在《正元胶囊防治癌因性疲乏的疗效及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:通过临床资料分析及建立癌因性疲乏（Cancer-related fatigue,CRF）肺癌裸小鼠模型,评价正元胶囊防治由肿瘤本身及化疗所引起的CRF的疗效,并明确中药复方正元胶囊缓解CRF的作用机制。方法:1.临床研究部分:使用Piper疲乏修订量表、自制中医辨证表,对191例CRF患者的疲乏程度与中医证型进行分析,结合我科既往研究结果,探讨正元胶囊防治癌因性疲乏的中医理论依据。2.动物实验部分:建立A549肺腺癌移植瘤裸小鼠模型。180只裸小鼠,随机抽取20作为正常对照（NC）组,不接种A549细胞,其余为接种A549细胞。接种完后,当瘤块长到50mm3-100mm3（接种后第7天）的时候,随机分为8组,每组20只。全部小鼠分为9组,即正常对照（NC）组、癌模型（TC）组、正元胶囊低剂量（ZD）组、正元胶囊中剂量（ZZ）组、正元胶囊高剂量（ZG）组,顺钼（P）组,顺铂+正元胶囊低剂量（LD）组、顺钼+正元胶囊中剂量（LZ）组、顺铂+正元胶囊高剂量（LG）组。中药（Z）组包括三个剂量亚组（ZD、ZZ、ZG组）,联合（L）组包括三个剂量亚组（LD、LZ、LG组）。参考药物等效剂量公式,设定正元胶囊低剂量组给药剂量为0.45g/kg,中剂量组为0.9g/kg,高剂量组为1.8g/kg,灌胃,每天1次。顺铂的给药剂量为5mg/kg,腹腔注射,每3天一次。分组后（A549细胞接种第7天）开始给药,每天一次,连续21天。正常对照组和癌模型组给予相应体积的生理盐水灌胃。通过观察并记录实验过程中小鼠的一般情况、体重、瘤体体积,并进行力竭游泳实验、悬尾实验、旷场实验,检测肝糖原含量,评价正元胶囊防治癌因性疲乏的疗效;运用流式细胞技术、瑞姬氏染色、ELISA、细胞因子抗体芯片技术,检测外周血细胞计数、骨髓有核细胞计数、骨髓细胞涂片、细胞因子、皮质酮、T3、T4等,初步阐明正元胶囊防治CRF的作用机制。结果:1.临床研究表明,脾气虚出现率最高,占80.6%,其次为肾气虚,占43.5%;有脾阳虚、肝气郁结的患者疲劳程度偏重,疲乏得分偏高（P<0.05）;有肾阳虚、肾气虚的患者疲劳程度偏重,疲乏得分偏高（P<0.001）。2.正元胶囊对CRF小鼠的药效学研究（1）正元胶囊对荷瘤小鼠一般情况的影响干预前,各组小鼠一般情况,包括体重均衡。干预3周后,小鼠一般情况从相对较好到差依次为NC组、ZD组、ZZ组、ZG组、TC组、LZ组、LD组、LG组、P组。荷瘤小鼠体重,NC组>TC组（P=0.023）,L组>P组（P=0.024）,表明正元胶囊能缓解化疗所致的CRF小鼠体重减轻。（2）正元胶囊对荷瘤小鼠躯体性疲劳的影响不同组小鼠在干预前力竭游泳时间均衡,干预18天时,TC组较NC组力竭游泳时间缩短（P<O.001）;Z组各剂量亚组时间均较TC组延长（P<0.001）;L组各剂量亚组时间均较P组明显延长（P≤0.001）;L组各剂量亚组时间较T（组延长（P<0.05）;LG组较LD组（P=）.001）、较LZ组（P=0）.017)游泳时间均延长。正元胶囊能延长肿瘤及化疗引起的CRF小鼠力竭游泳时间缩短,缓解躯体性疲劳;联合化疗时,高剂量组游泳时间最长,即高剂量正元胶囊缓解顺钼化疗引起的躯体性疲劳效果更佳。肝糖原的检测结果表明,TC组与NC组间无统计学差异（P=0.360）,Z组肝糖原较TC组上升（P<0.001）,L组较P组上升（P<0.001）,L组较TC组上升（P=0.015）。正元胶囊能增加未化疗及接受化疗的CRF小鼠的肝糖原储备,有助于缓解疲劳。（3）正元胶囊对荷瘤小鼠精神性疲劳的影响悬尾实验表明,TC组不动时间较NC组延长（P=0.031）。Z组较TC组显着缩短（P<0.001）,L组较P组显着缩短（P<0.001）。正元胶囊能缩短肿瘤及化疗所致的悬尾不动时间延长。旷场实验表明,NC组总运动距离（P=0.040）、外周格运动距离（P=）.039)、平均速度（P=0.040）均高于TC组,中央格运动距离（P=）.046)低于TC组,休息时（P=0.351）、大便粒数（P=0.228）两组间无差别。Z组中央格运动距离较TC组明显缩短（P<0.001）。L组总运动距离（P=0.018）、外周格运动距离（P=）.002)、平均速度（P=0.017）较P组上升,中央格运动距离（P<0.001）较P组显着下降。休息时间在各组荷瘤小鼠间并未发现有明显差异。大便粒数,Z组最多,P组最少。正元胶囊能改善CRF小鼠的旷场运动情况。（4）正元胶囊对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用P组（P=）.001)、L组（P<0.001）、Z组（P=0.030）的瘤重较TC组均有减轻,Z组、L组、P组的抑瘤率分别为26.9%、60.0%、57.1%。干预19d时,P组瘤体体积小于TC组（P=0.019）、L组瘤体体积小于TC组（P<0.001）。正元胶囊能在一定程度上抑制肿瘤生长,与化疗药物顺铂配合,能进一步缩小肿瘤,提高抑瘤率。3.正元胶囊对CRF小鼠造血及免疫功能的影响外周血WBC计数、HGB含量,骨髓有核细胞计数,均表现为L组>P组（P<0.001）;未发现正元胶囊对RBC、PLT计数有影响。血清中细胞因子含量:EP0水平,Z组>TC组（P=0.049）,L组>P组（P=）.038)。G-CSF水平,L组>P组（P=0.043）。IL-3水平,LD组>P组（P=0.001）,Z组各亚组较TC 组上升（P<0.05）,ZD 组>ZG 组（P=0.003）,LD 组>LZ 组（P<0.001）。TNF-α水平,ZG 组较 TC 组下降（P=）.004),LZ 组（P=0.013）、LG 组（P=）.010)较 P 组下降,ZG 组较 ZD 组（P=）.05)、ZZ 组均有下降（P=）.024),LZ 组（P=）.026)、LG 组（P=）.021)均较LD下降。IL-6水平,ZZ组、ZG组均较TC下降（P<0.001）,LD组、LZ组、1LG组均较P组下降（P<0.001）,ZZ组、ZG组较ZD组均有下降（P<0.001）,LZ组较LD组（P<0.001）、LG组（P=0.017）均有下降。IL-2水平,Z组各剂量亚组IL-2水平较TC组均上升（P<0.05）,且随着中药剂量上升,IL-2的上升幅度增大;LZ组和LG组IL-2水平均高于P组（P<0.001）,且中药剂量越高,IL-2的上升幅度越大。以上结果表明正元胶囊能提高肿瘤及化疗所致CRF小鼠血清EPO水平下降;提高化疗所致的外周血白细胞、血色素下降,骨髓有核细胞计数减少,血清G-CSF水平降低;提高血清IL-3水平,且低剂量组效果更佳;降低血清TNF-αα水平,但最佳剂量未能确定;降低血清IL-6水平,且中剂量组效果更佳;还能提高血清IL-2水平,且IL-2水平随着中药剂量的上升而上升。未发现正元胶囊对血清IL-1 β水平有影响。此外,正元胶囊能增加化疗后CRF小鼠的脾脏指数,表现为L组脾脏指数较P组上升（P=0.013）。4.正元胶囊对CRF小鼠内分泌功能的影响血清T3水平,Z组>TC组（P<0.001）、L组>P组（P<0.001）。血清T4水平,Z组>TC组（P=0.002）。正元胶囊能提高CRF小鼠血清T3、T4水平;提高化疗后CRF小鼠血清T3水平。未发现正元胶囊对血清皮质酮有影响。结论:1.CRF主要涉及脾、肾,与肺、肝相关,脾气不足、肾精亏虚、痰瘀毒结可能是CRF的病机所在。正元胶囊能益气健脾、补肾填精,兼软坚散结,可针对CRF的病机治疗。2.正元胶囊能缓解CRF小鼠的躯体性及精神性疲劳,从而防治癌因性疲乏;提高CRF小鼠的肝糖原储备是正元胶囊防治CRF的作用机制之一。3.改善造血及免疫功能是正元胶囊防治CRF的作用机制之一。4.改善甲状腺功能是正元胶囊防治CRF的作用机制之一。
芦冲[9]（2016）在《尖叶假龙胆醇提物对H22荷瘤小鼠及人肝癌Bel-7402细胞的影响和机制研究》文中研究说明目的观察尖叶假龙胆对H22荷瘤小鼠及人肝癌Bel-7402细胞的作用及其相关机制。方法体外实验:制备低、中、高剂量尖叶假龙胆醇提物（EEGA）含药血清,体外培养人肝癌Bel-7402细胞。实验分为空白组、EEGA含药血清低、中、高剂量组和阳性药组（5-FU）。应用MTT技术分析EEGA含药血清对人肝癌Bel-7402细胞抑制增殖的影响;采用流式细胞术分析EEGA含药血清对人肝癌Bel-7402细胞凋亡率和周期的分布的影响;RT-PCR检 测 人肝癌Bel-7402细 胞 内 Bax、Bcl-2和caspase-3 mRNA水平;western blot检测人肝癌 Bel-7402 细胞内Bax、Bcl-2和活化的caspase-3蛋白水平。体内实验:建立H22荷瘤小鼠模型,随机分成六组:空白组、模型组、EEGA低、中、高剂量组和阳性药组。空白组、模型组灌胃生理盐水,EEGA低、中、高剂量组分别灌胃定量药物,阳性药组腹腔注射5-Fu。观察荷瘤小鼠一般生存状态,测定肿瘤抑制率;测定各组小鼠脾脏指数、胸腺指数;采用Elisa法检测各组小鼠血浆TNF-α、IL-1 β、IL-6 的含量;流式细胞术检测各组小鼠外周血CD3+、CD、CD8+淋巴细胞;流式细胞术检测各组小鼠脾脏CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞;瘤组织包埋切片处理后进行HE染色,TUNEL染色观察肿瘤细胞凋亡情况;通过免疫组化检测肿瘤组织内Bax、Bcl-2,caspase-3、VEGF水平;RT-PCR检测肿瘤组织内 Bax、Bcl-2 和 caspase-3mRNA水平;western blot法检测肿瘤组织Bax、Bcl-2和活化的caspase-3蛋白水平。结果1体外实验1.1 MTT法检测结果显示,与空白组比较,EEGA各组和阳性药组都有效抑制了人肝癌Bel-7402细胞的增殖。EEGA各组随着药物浓度增加、作用时间增长,抑制率升高。1.2流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,正常培养的人肝癌Bel-7402细胞与正常大鼠血清作用后的细胞的凋亡率差别不大,约为5-10%。EEG A低、中、高剂量组和阳性药组都能够明显诱导人肝癌Bel-7402细胞的凋亡。1.3流式细胞仪检测细胞周期分布结果显示,EEGA各组及阳性药组均引起人肝癌Bel-7402细胞周期阻滞,表现在G0/G 1期细胞比例增加,S期细胞比例减少。1.4 RT-PCR结果显示,正常大鼠血清对人肝癌Bel-7402细胞 内 Bax、Bcl-2和caspase-3 mRNA水平没有 明 显 的 影响,EEGA各剂量组和阳性药组都能够使Bax mRNA的表达上调,同时下调Bcl-2mRNA的表达,明显上调Bax/Bcl-2mRNA的比值,诱导caspase-3mRNA表达明显上调。EEGA各剂量组间比较显示,EEGA各剂量组对人肝癌Bel-7402细胞内Bax、Bcl-2和caspase-3 mRNA水平的影响呈一定的量效关系。1.5 Western blot检测结果显示,正常大鼠血清对人肝癌Bel-7402细胞内Bax、Bcl-2和活化caspase-3蛋白水平没有明显的影响。EEGA各剂量组和阳性药组都能够明显诱导Bax蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达,明显上调Bax/Bcl-2蛋白的比值,上调活化的caspase-3蛋白水平。EEGA各剂量组间比较显示,EEGA各剂量组对人肝癌Bel-7402细胞内Bax、Bcl-2和活化的caspase-3 蛋白水平的影响呈一定的量效关系。2体内实验2.1H22荷瘤小鼠造模成功率1 0 0%,造模后期模型组荷瘤小鼠瘤体生长迅速,各方面状态变差,体重减轻。阳性药组与模型组比较,瘤体增长减慢,但体重下降明显、各方面状态欠佳。EEGA各剂量组与模型组比较,瘤体增长减慢,各方面状态良好。2.2与模型组比较,EEGA各组及阳性药组平均瘤重明显降低。EEG A低、中、高剂量组抑瘤率分别为:1 7.62%、27.75%、3 8.2 8%,阳性药组抑瘤率为64.1 8%。2.3 EEGA中、高剂量组,与模型组比较略升高,有统计学意义,各剂量组及模型组与5-FU组、正常组比较,脾指数均有显着性差异,提示EEGA可以增强荷瘤小鼠的免疫功能,而5-FU在抑制肿瘤的同时,也破坏了机体的免疫功能。2.4EEGA各剂量组胸腺指数均大于荷瘤对照组,但无统计学意义,而5-FU组可使胸腺指数明显降低,与各组比较均有差异。2.5Elisa法检测荷瘤小鼠血浆TNF-α、IL-1 β、IL-6的含量结果显示,同空白组比较,模型组血浆中细胞因子的含量明显降低。同模型组比较,EEGA各剂量组血浆内细胞因子的含量升高,同空白组比较,阳性药组血浆内这些细胞因子的含量减少。2.6流式细胞仪检测结果显示,同空白组比较,模型组小鼠外周血T淋巴细胞中CD4+细胞比例降低,CD8+细胞比例升高,CD4+/CD8+的比值降低。同模型组比较,EEGA各剂量组CD4+细胞比例升高,CD8+细胞比例降低,CD4+/CD8+的比值升高,阳性药无明显改善。2.7流式细胞仪检测结果显示,同空白组比较,模型组小鼠脾脏T淋巴细胞中CD4+细胞比例降低,CD8+细胞比例升高,CD4+/CD8+的比值降低。同模型组比较,EEGA各剂量组CD4+细胞比例升高,CD8+细胞比例降低,CD4+/CD8+的比值升高,阳性药无明显改善。2.8HE染色结果显示,模型组肿瘤细胞生长旺盛,可见丰富新生微血管。EEGA各组和阳性药组肿瘤细胞生长局限,新生微血管较少。2.9TUNEL染色结果显示,模型组肿瘤组织细胞凋亡率在1 0%左右,EEGA低、中、高剂量组和阳性药组肿瘤组织细胞凋亡率分别为 25.88±1.96%、35.38±2.1 3%、47.38±3.58%、74.63±2.07%。2.10免疫组化结果显示,与模型组比较,EGGA低、中、高剂量组和阳性药组B ax 阳性细胞比例递增,Bcl-2 阳性细胞比例递减,Bax/Bcl-2比例递增,活化的caspase-3阳性细胞比例递增。而VEGF的阳性表达在各组之间无显着差异。2.1 1 RT-PCR检测结果显示,与模型组比较,EEGA各组和阳性药组都能够上调Bax mRNA的表达,下调Bcl-2 mRNA的表达,上调Bax/Bcl-2 mRNA的比值,上调caspase-3 mRNA表达,且在EEGA各剂量组中呈一定的量效关系。2.12 western blot检测结果显示,与模型组比较,EEGA各剂量组和阳性药组都能够明显诱导Bax蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达,明显上调Bax/Bcl-2蛋白的比值,上调活化的caspase-3蛋白水平,且在EEGA各剂量组中呈一定的量效关系。结论1.尖叶假龙胆醇提物含药血清可抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,能够诱导其凋亡、影响细胞周期分布。2.尖叶假龙胆可抑制H22荷瘤小鼠肿瘤细胞生长,能诱导其凋亡。3.尖叶假龙胆可改善H22荷瘤小鼠机体免疫力。4.尖叶假龙胆可通过调节Bax与Bcl-2的比值及活化的caspase-3蛋白水平来实现抗肝癌作用。
董祺,高志惠[10]（2016）在《蛹虫草子实体胶囊对S180小鼠抗肿瘤作用的实验研究》文中指出采用小鼠腋下S180实体瘤模型,通过检测抑瘤率、免疫器官重量以及血清NSE、CEA、CA72-4等指标,全面评价蛹虫草子实体胶囊对S180小鼠的抗肿瘤作用。结果表明,蛹虫草子实体胶囊中、高剂量能明显抑制S180实体瘤的生长（P<0.05）;高、中、低剂量均可延长S180腹水瘤小鼠的生存时间;高、中、低剂量组均能降低血清NSE的值;中、低剂量组均能增加血清CEA的值;高剂量组能增加血清CA72-4值,而中、低剂量则减少血清CA72-4值。研究认为,蛹虫草子实体胶囊对S180小鼠具有一定的抗肿瘤作用。
二、康莱胶囊对荷瘤小鼠抗肿瘤作用的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、康莱胶囊对荷瘤小鼠抗肿瘤作用的实验研究（论文提纲范文）
（1）艾可清颗粒减轻环磷酰胺心脏毒性的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 环磷酰胺诱导心脏毒性的分子机制 |
| 1.2 补肾健脾方对肿瘤化疗增效减毒的实验和临床研究进展 |
| 第二章 艾可清对环磷酰胺中毒小鼠毒副反应的影响 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 药品及试剂 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 动物分组及处理 |
| 1.2.2 生存曲线分析 |
| 1.2.3 血常规检测 |
| 1.2.4 生化指标检测 |
| 1.2.5 HE染色 |
| 1.2.6 统计学分析 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 实验动物的一般状况 |
| 1.3.2 生存曲线分析 |
| 1.3.3 AKQ对CTX染毒小鼠血常规的影响 |
| 1.3.4 AKQ对CTX染毒小鼠主要脏器生化指标的影响 |
| 1.3.5 主要脏器HE染色 |
| 1.4 讨论 |
| 第三章 艾可清对环磷酰胺中毒小鼠心脏毒性的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 药品及试剂 |
| 2.1.3 主要耗材 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物分组及处理 |
| 2.2.2 心脏指数计算 |
| 2.2.3 血清心肌酶及氧化指标测定 |
| 2.2.4 心脏组织HE染色 |
| 2.2.5 心肌凋亡相关蛋白免疫印迹 |
| 2.2.6 统计学分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 AKQ对CTX中毒小鼠心脏指数的影响 |
| 2.3.2 AKQ对CTX中毒小鼠心肌酶及氧化指标的影响 |
| 2.3.3 AKQ对CTX中毒小鼠心脏组织病理改变的影响 |
| 2.3.4 AKQ对CTX染毒小鼠心肌凋亡相关蛋白的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第四章 艾可清对丙烯醛所致心肌细胞损伤的影响及机制探讨 |
| 3.1 药物制备及作用剂量的确定 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.1.3 实验结果 |
| 3.2 AKQ对ACR所致H9C2损伤的影响 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.2.3 实验结果 |
| 3.3 AKQ缓解CTX心脏毒性的网络药理学分析 |
| 3.3.1 材料与方法 |
| 3.3.2 实验结果 |
| 3.4 AKQ缓解ACR心肌细胞毒性的通路靶点验证 |
| 3.4.1 实验材料 |
| 3.4.2 实验方法 |
| 3.4.3 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 第五章 艾可清对荷瘤小鼠CTX心脏毒性的影响及机制探讨 |
| 4.1 AKQ对荷瘤小鼠CTX心脏毒性的影响 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.1.3 实验结果 |
| 4.2 AKQ对荷瘤小鼠CTX心脏毒性影响的血清代谢组学研究 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.3 实验结果 |
| 4.3 AKQ对肉瘤小鼠CTX心脏毒性影响的肠道菌群分析 |
| 4.3.1 实验材料 |
| 4.3.2 实验方法 |
| 4.3.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表的论文 |
| 致谢 |
| 附件 |
（2）白英总碱抗NSCLC的物质基础和作用机制及临床前安全性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 前言 |
| 第一章 中药白英的本草考证、物质基础及药用研究进展 |
| 1 本草考证 |
| 1.1 名称考证 |
| 1.2 基原考证 |
| 2 白英的药理作用研究 |
| 2.1 抗肿瘤作用 |
| 2.2 对免疫系统的影响 |
| 2.3 抗菌抗病毒作用 |
| 2.4 其他作用 |
| 3 白英临床应用研究 |
| 3.1 肿瘤 |
| 3.2 其他临床应用 |
| 4 白英药效物质基础研究 |
| 4.1 化学成分研究 |
| 4.2 白英单体成分的活性研究 |
| 5 小结与讨论 |
| 第二章 白英总生物碱的化学成分研究 |
| 引言 |
| 1 研究结果 |
| 2 化合物的结构解析 |
| 3 实验部分 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 主要仪器 |
| 4 本章小结 |
| 第三章 白英总碱及其化学成分的抗肿瘤活性研究 |
| 引言 |
| 第一节 白英单体生物碱的体外抗肿瘤活性研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 主要药物及试剂 |
| 1.3 相关溶液的配制 |
| 1.4 主要仪器及耗材 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 白英生物碱对Td-ECs细胞增殖的影响 |
| 2.3 白英单体化合物对Td-ECs细胞划痕愈合的影响 |
| 2.4 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 白英单体化合物对Td-ECs细胞增殖影响 |
| 3.2 白英单体化合物对Td-ECs细胞划痕愈合的影响 |
| 4 小结与讨论 |
| 第二节 TAS不同极性部位对S_(180)小鼠移植瘤的抑制及免疫调节作用 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞株及动物 |
| 1.2 主要药物及试剂 |
| 1.3 相关溶液的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物移植瘤模型制备 |
| 2.2 动物分组与给药 |
| 2.3 抑瘤率、胸腺和脾脏指数检测 |
| 2.4 ELISA法检测血清细胞因子水平 |
| 2.5 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 TAS不同极性部位对S_(180)小鼠移植瘤抑制作用 |
| 3.2 TAS对S_(180)荷瘤小鼠的免疫调节作用 |
| 4 小结与讨论 |
| 本章小结 |
| 第四章 白英生物碱及人参皂苷Rg3调控肿瘤外泌体的生成和功能抑制肿瘤血管新生研究 |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 1.1 动物及细胞株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 主要药物和溶液及其配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 白英生物碱及人参皂苷Rg3对A549细胞增殖的影响 |
| 2.3 A549细胞LDH漏出检测 |
| 2.4 A549细胞外泌体的提取 |
| 2.5 Western Blotting检测外泌体标记蛋白 |
| 2.6 透射电镜检测外泌体超微结构 |
| 2.7 外泌体粒度检测 |
| 2.8 白英生物碱及人参皂苷Rg3对TEXs体外对血管新生作用的影响 |
| 2.9 蛋白质组学 |
| 2.10 A549细胞裸鼠移植瘤抑制率实验 |
| 2.11 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 白英生物碱对A549细胞增殖影响 |
| 3.2 SA1及Rg3对A549细胞LDH漏出量的影响 |
| 3.3 A549细胞外泌体的鉴别 |
| 3.4 A549细胞外泌体对HUVECs血管新生的影响 |
| 3.5 白英生物碱及Rg3对A549细胞外泌体粒度的影响 |
| 3.6 白英生物碱干预后的A549细胞外泌体对HUVECs血管新生的影响 |
| 3.7 白英生物碱SA1对A549细胞外泌体蛋白质组的影响 |
| 3.8 白英生物碱SA1干预后的A549细胞外泌体对A549裸鼠移植瘤的影响 |
| 4 本章小结 |
| 第五章 白英总碱(安特逍胶囊)的临床前安全性研究 |
| 引言 |
| 第一节 安特逍胶囊的安全药理学研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 主要药物及试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 小鼠的协调运动和自主活动实验 |
| 2.2 小鼠戊巴比妥钠阈下剂量致催眠作用 |
| 2.3 Beagle犬的心血管系统及呼吸系统功能检测 |
| 2.4 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 AtxC对小鼠协调运动的影响 |
| 3.2 AtxC对小鼠自主活动次数的影响 |
| 3.3 AtxC对小鼠戊巴比妥钠阈下剂量的催眠作用影响 |
| 3.4 AtxC对Beagle犬心电、血压及呼吸指标的影响 |
| 4 小结与讨论 |
| 第二节 安特逍胶囊的单次给药毒性研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 主要药物及试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 大鼠急性毒性实验 |
| 2.2 Beagle犬单次给药毒性实验 |
| 2.3 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠单次给药毒性实验结果 |
| 3.2 Beagle犬单次给药毒性实验结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 第三节 安特逍胶囊的重复给药毒性研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 主要药物 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 大鼠26周灌胃重复给药毒性实验 |
| 2.2 Beagle犬39周灌胃重复给药毒性实验 |
| 2.3 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 AtxC灌胃重复给药26周对大鼠的毒性作用 |
| 3.2 AtxC灌胃重复给药39周对Beagle犬的毒性作用 |
| 4 小结与讨论 |
| 本章小结 |
| 第六章 全文总结 |
| 1 总结 |
| 2 展望 |
| 3 创新点 |
| 4 局限性 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附录 |
| 附图 |
| 附件 |
（3）荸荠皮和浒苔的化学成分及其抗肿瘤、抗菌活性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词一览 |
| 鉴别反应一览 |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 可食用植物中具有抗肿瘤作用的活性成分研究进展 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 可食用植物中具有抗肿瘤作用的活性成分 |
| 2.2.1 多糖类 |
| 2.2.2 黄酮类 |
| 2.2.2.1 黄酮类单体化合物 |
| 2.2.2.2 黄酮类混合物 |
| 2.2.3 萜类 |
| 2.2.3.1 单萜 |
| 2.2.3.2 倍半萜 |
| 2.2.3.3 二萜 |
| 2.2.3.4 三萜 |
| 2.2.4 生物碱类 |
| 2.2.5 其他 |
| 2.3 展望 |
| 第三章 荸荠皮化学成分及营养成分研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 荸荠皮的化学成分 |
| 3.2.1 化合物名称 |
| 3.2.2 化合物结构 |
| 3.2.3 化合物结构鉴定 |
| 3.3 干燥荸荠皮的营养成分 |
| 3.3.1 一般营养成分 |
| 3.3.2 矿物元素含量 |
| 3.3.3 氨基酸含量 |
| 3.4 实验部分 |
| 3.4.1 仪器及试剂 |
| 3.4.2 药材 |
| 3.4.3 化合物的提取与分离 |
| 3.4.4 营养成分测定 |
| 3.4.4.1 一般营养成分测定 |
| 3.4.4.2 矿物元素含量测定 |
| 3.4.4.3 氨基酸含量测定 |
| 3.5 化合物的物理常数及光谱数据 |
| 第四章 浒苔的化学成分研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 浒苔的化学成分研究结果 |
| 4.2.1 化合物名称 |
| 4.2.2 化合物结构 |
| 4.2.3 化合物结构鉴定 |
| 4.3 实验部分 |
| 4.3.1 仪器及试剂 |
| 4.3.2 药材 |
| 4.3.3 化合物的提取与分离 |
| 4.4 化合物的物理常数及光谱数据 |
| 第五章 抗菌活性研究 |
| 5.1 荸荠皮中部分化合物抗菌活性结果 |
| 5.2 浒苔中部分化合物抗菌活性结果 |
| 5.3 实验部分 |
| 5.3.1 实验仪器与药品 |
| 5.3.2 实验步骤 |
| 5.4 总结及讨论 |
| 第六章 抗肿瘤活性研究 |
| 6.1 荸荠皮中部分化合物体外抗肿瘤活性研究结果 |
| 6.1.1 抗肿瘤活性评价 |
| 6.1.2 Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析细胞凋亡情况 |
| 6.1.3 Hoechst 33258荧光染色检测T24细胞凋亡情况 |
| 6.1.4 吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色检测T24细胞凋亡情况 |
| 6.1.5 线粒体跨膜电位ΔΨm检测结果分析 |
| 6.1.6 Western blot蛋白印记结果分析 |
| 6.1.7 细胞内ROS检测结果分析 |
| 6.2 浒苔中部分化合物体外抗肿瘤活性研究结果 |
| 6.3 实验部分 |
| 6.3.1 实验仪器与药品 |
| 6.3.2 MTT法测定抗肿瘤活性 |
| 6.3.3 Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析细胞凋亡 |
| 6.3.4 Hoechst 33258染色 |
| 6.3.5 吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色 |
| 6.3.6 线粒体跨膜电位ΔΨm检测 |
| 6.3.7 Western blot蛋白印记分析 |
| 6.3.8 细胞内ROS检测 |
| 6.4 总结及讨论 |
| 第七章 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 硕士学位期间主要科研成果 |
| 附录 部分化合物图谱 |
（4）复方白花蛇舌草胶囊抗肿瘤作用的初步研究（论文提纲范文）
| 1 实验材料 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 试药 |
| 1.3 细胞株及瘤株 |
| 1.4 仪器和试剂 |
| 2 方法与结果 |
| 2.1 复方白花蛇舌草胶囊含药动物血清的制备 |
| 2.2 复方白花蛇舌草胶囊含药血清对肿瘤细胞克隆的影响 |
| 2.3 复方白花蛇舌草胶囊含药血清对肿瘤细胞增殖的影响 |
| 2.4 复方白花蛇舌草胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 |
| 2.5 复方白花蛇舌草胶囊对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用 |
| 2.6 复方白花蛇舌草胶囊对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用 |
| 3 讨论 |
（5）长白山刺五加多糖开发的药理基础研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 刺五加的研究现状 |
| 1.1 刺五加化学成分的研究现状 |
| 1.2 刺五加药理作用的研究现状 |
| 第二章 刺五加多糖药理作用的研究现状 |
| 2.1 刺五加多糖的抗肿瘤作用 |
| 2.2 刺五加多糖的免疫调节作用 |
| 2.3 刺五加多糖的神经元保护作用 |
| 2.4 刺五加多糖的抗氧化作用 |
| 2.5 刺五加多糖的其他作用 |
| 第三章 刺五加制剂的临床应用现状 |
| 3.1 刺五加注射液的临床应用现状 |
| 3.2 刺五加片或胶囊的临床应用现状 |
| 3.3 刺五加茶的应用现状 |
| 第四章 植物多糖药理作用的研究现状 |
| 4.1 植物多糖的免疫调节作用 |
| 4.2 植物多糖的抗肿瘤作用 |
| 4.3 植物多糖的抗病毒作用 |
| 4.4 植物多糖的抗氧化作用 |
| 4.5 植物多糖的降血压、抗血栓作用 |
| 4.6 植物多糖的降血糖作用 |
| 4.7 植物多糖对免疫性肝损伤的保护作用 |
| 第五章 问题与展望 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 长白山刺五加多糖的提取、分离和鉴定 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果与分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 第二章 长白山刺五加多糖抗炎作用的研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 长白山刺五加多糖镇痛作用的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 长白山刺五加多糖防治抗结核药物性肝损伤作用的研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 长白山刺五加多糖辅助治疗结核性胸膜炎作用的研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 长白山刺五加多糖抗肿瘤作用的研究 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.2 结果分析 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 长白山刺五加多糖延缓衰老作用的研究 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.2 结果与分析 |
| 7.3 讨论 |
| 7.4 小结 |
| 第八章 长白山刺五加多糖对学习记忆能力改善作用的研究 |
| 8.1 材料与方法 |
| 8.2 结果与分析 |
| 8.3 讨论 |
| 8.4 小结 |
| 第九章 长白山刺五加多糖胶囊剂制备工艺的研究 |
| 9.1 材料与方法 |
| 9.2 结果与分析 |
| 9.3 讨论 |
| 9.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（6）当归红芪超滤物辅助12C6+重离子束治疗肝癌减毒增效实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章：超高效液相色谱-质谱联用技术对当归红芪组方水提物不同组分的差异分析 |
| 引言 |
| 研究内容 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章：~(12)C~(6+)重离子束辐射诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡作用及机制研究 |
| 引言 |
| 研究内容 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 小鼠H22肝癌细胞的原代培养及H22荷瘤小鼠模型的构建 |
| 引言 |
| 研究内容 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章：当归红芪超滤物对 ~(12)C~(6+)重离子束治疗H22荷瘤小鼠的减毒效应研究 |
| 引言 |
| 研究内容 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第五章：当归红芪超滤物对 ~(12)C~(6+)重离子束治疗H22荷瘤小鼠的增效作用研究 |
| 引言 |
| 研究内容 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第六章：当归红芪超滤物对 ~(12)C~(6+)重离子束治疗H22荷瘤小鼠的减毒增效分子机制探讨 |
| 引言 |
| 研究内容 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 综述综述： 益气养血药及复方在肿瘤放疗中减毒增效作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录(一)：发表文章目录和参与课题 |
| 附录(二)：英文缩略词表（Abbreviations） |
| 附录（三）：甘肃实验动物质量合格证 |
| 附录（四）：甘肃动物设施使用证明 |
| 致谢 |
（7）壮药癌痛消胶囊干预肝癌（H22）荷瘤小鼠的实验研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及瘤株: |
| 1.2 药物与试剂: |
| 1.3 主要仪器: |
| 1.4 分组与造模: |
| 1.5 实验给药方法: |
| 1.6 实验观察指标 |
| 1.6.1 一般情况: |
| 1.6.2 H22荷瘤小鼠模型的抑瘤率: |
| 1.6.3 检测各组小鼠血清中TNF-α、IFN-γ水平: |
| 1.6.4 癌痛消胶囊对H22荷瘤小鼠脾脏T淋巴细胞增殖能力的影响: |
| 1.7 统计学方法: |
| 2 结果 |
| 2.1 一般情况: |
| 2.2 癌痛消胶囊对H22荷瘤小鼠抑瘤率及重要脏器指数的影响: |
| 2.3 癌痛消胶囊对H22荷瘤小鼠血清TNF-α、IFN-γ水平的影响: |
| 2.4 癌痛消胶囊对H22荷瘤小鼠脾脏T淋巴细胞增殖能力的影响: |
| 3 讨论 |
（8）正元胶囊防治癌因性疲乏的疗效及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1 癌因性疲乏的定义及诊断 |
| 2 癌因性疲乏的病因 |
| 2.1 肿瘤本身 |
| 2.2 肿瘤治疗 |
| 2.3 肿瘤及其治疗的并发症 |
| 3 癌因性疲乏的发病机制 |
| 3.1 贫血及骨髓抑制 |
| 3.2 下丘脑-垂体-肾上腺轴/甲状腺轴失调 |
| 3.3 炎症细胞因子失调 |
| 3.4 中枢5-羟色胺能系统功能紊乱 |
| 3.5 昼夜节律改变 |
| 3.6 单核苷酸的多态性 |
| 3.7 骨骼肌受损 |
| 3.8 其他 |
| 4 癌因性疲乏的评估 |
| 5 癌因性疲乏的干预 |
| 5.1 药物治疗 |
| 5.2 非药物治疗 |
| 6 中医药与癌因性疲乏 |
| 6.1 中医病因病机 |
| 6.2 中医药治疗概况 |
| 6.3 小结 |
| 7 正元胶囊的研究进展 |
| 7.1 正元胶囊的组方分析 |
| 7.2 正元胶囊单味药的研究简况 |
| 7.3 小结与展望 |
| 第二章 正元胶囊防治癌因性疲乏的中医理论研究 |
| 1 研究方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 研究工具 |
| 1.6 调查方式 |
| 1.7 统计方法 |
| 2 研究结果 |
| 2.1 一般资料分析 |
| 2.2 脏腑虚损情况 |
| 2.3 病理产物分布 |
| 2.4 疲乏程度 |
| 2.5 疲乏程度的影响因素分析 |
| 3 讨论 |
| 第三章 正元胶囊对CRF小鼠的药效学研究 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 药品与试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 方法 |
| 1.6 统计方法 |
| 1.7 技术路线 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 正元胶囊对荷瘤小鼠一般情况的影响 |
| 2.2 正元胶囊对荷瘤小鼠躯体性疲劳的影响 |
| 2.3 正元胶囊对荷瘤小鼠精神性疲劳的影响 |
| 2.4 正元胶囊对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用 |
| 3 讨论 |
| 3.1 CRF干预药物的选择 |
| 3.2 CRF动物模型的选择与建立 |
| 3.3 小鼠CRF动物模型的评价 |
| 第四章 正元胶囊对CRF小鼠造血及免疫功能的影响 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 动物与细胞 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 方法 |
| 1.5 统计方法 |
| 1.6 技术路线 |
| 2 结果 |
| 2.1 正元胶囊对外周血细胞的影响 |
| 2.2 正元胶囊对骨髓有核细胞的影响 |
| 2.3 正元胶囊对造血、免疫相关细胞因子的影响 |
| 2.4 正元胶囊对脾脏指数的影响 |
| 2.5 正元胶囊对骨髓细胞涂片的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 正元胶囊对CRF小鼠造血功能的影响 |
| 3.2 正元胶囊对CRF小鼠免疫功能的影响 |
| 3.3 小结 |
| 第五章 正元胶囊对CRF小鼠内分泌功能的影响 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 动物与细胞 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 方法 |
| 1.5 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 正元胶囊对血清T3的影响 |
| 2.2 正元胶囊对血清T4的影响 |
| 2.3 正元胶囊对血清皮质酮的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 正元胶囊对甲状腺功能的影响 |
| 3.2 正元胶囊对肾上腺皮质功能的影响 |
| 3.3 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（9）尖叶假龙胆醇提物对H22荷瘤小鼠及人肝癌Bel-7402细胞的影响和机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 1 现代医学对原发性肝癌的研究概述 |
| 1.1 现代医学对于肝癌的认识 |
| 1.2 现代医学对肝癌的病因和发病机制的研究 |
| 1.3 现代医学对肝癌的治疗现状 |
| 2 祖国医学对原发性肝癌的研究概述 |
| 2.1 祖国医学对肝癌病名的认识 |
| 2.2 肝癌的病因病机 |
| 2.3 肝癌的治则治法 |
| 2.4 辨证分型 |
| 2.5 治疗 |
| 2.5.1 辨证论治 |
| 2.5.2 专方专药的治疗 |
| 2.5.3 中成药的治疗 |
| 2.5.4 中药注射液治疗 |
| 2.5.5 中药外治法治疗 |
| 2.5.6 原发性肝癌的中西医综合治疗 |
| 3 抗肿瘤中药的作用机制研究 |
| 3.1 杀伤和抑制肝癌细胞增殖 |
| 3.2 诱导肝癌细胞分化凋亡 |
| 3.3 提高免疫功能,抑制肝癌转移与复发 |
| 3.4 抑制端粒酶活性 |
| 3.5 逆转多药耐药性 |
| 4 尖叶假龙胆的研究进展 |
| 4.1 尖叶假龙胆的植物性状与药材形状特点 |
| 4.2 尖叶假龙胆的主要产地 |
| 4.3 尖叶假龙胆的化学成分研究 |
| 4.4 尖叶假龙胆化学成分抗癌的作用研究 |
| 4.4.1 龙胆苦苷抗肝癌的药理作用研究进展 |
| 4.4.2 齐墩果酸和熊果酸抗肝癌的药理作用研究进展 |
| 实验研究 |
| 体外细胞实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 仪器设备 |
| 1.2 主要试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 尖叶假龙胆醇提物(EEGA)制备 |
| 2.2 EEGA含药血清制备 |
| 2.3 体外细胞的培养 |
| 2.4 实验分组 |
| 2.5 MTT法检测细胞增值的影响 |
| 2.6 流式检测细胞凋亡影响和周期的分布情况 |
| 2.7 RT-PCR检测细胞内Bax、Bcl-2和caspase-3 mRNA表达水平 |
| 2.8 Westen blot检测细胞内Bax、Bcl-2和活化的caspase-3蛋白表达水平 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 MTT结果 |
| 3.2 流式细胞仪检测凋亡率 |
| 3.3 流式细胞仪检测细胞周期分布 |
| 3.4 Bax、Bcl-2和caspase-3 mRNA相对表达量 |
| 3.5 Bax、Bcl-2和活化的caspase-3蛋白相对表达量 |
| 动物实验研究 |
| 1 EEGA对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验细胞 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 主要实验试剂 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 实验结果 |
| 1.6.1 EEGA对H_(22)肝癌小鼠一般状况的影响 |
| 1.6.2 EEGA对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用 |
| 2 EEGA增强H_(22)肝癌小鼠免疫功能的实验研究 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 细胞株 |
| 2.3 主要仪器设备 |
| 2.4 试验药物及试剂: |
| 2.5 实验方法 |
| 2.6 指标检测方法 |
| 2.6.1 脾脏指数、胸腺指数测定 |
| 2.6.2 Elisa法检测小鼠血浆TNF-α、IL-1β、IL-6的含量 |
| 2.6.3 流式细胞术检测H22肝癌小鼠脾脏CD_4~+、CD_8~+淋巴细胞 |
| 2.6.4 流式细胞术检测H22肝癌小鼠外周血CD_4~+、CD_8~+淋巴细胞 |
| 2.7 实验结果 |
| 2.7.1 EEGA对H_(22)肝癌小鼠脾脏指数的影响 |
| 2.7.2 EEGA对肝癌小鼠胸腺指数的影响 |
| 2.7.3 EEGA对H_(22)肝癌小鼠血浆TNF-α、IL-1β、IL-6的影响 |
| 2.7.4 EEGA对H_(22)肝癌小鼠脾细胞T淋巴细胞亚群CD_4~+、CD_8~+、CD_4~+/CD_8~+的影响 |
| 2.7.5 EEGA对H_(22)肝癌小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD_4~+、CD_8~+、CD_4~+/CD_8~+的影响 |
| 3 EEGA抑制肝癌机制探讨 |
| 3.1 实验动物 |
| 3.2 细胞株 |
| 3.3 主要仪器设备 |
| 3.4 试验药物及试剂 |
| 3.5 造模方法 |
| 3.6 指标检测方法 |
| 3.7 实验结果 |
| 3.7.1 HE染色结果 |
| 3.7.2 TUNEL结果 |
| 3.7.3 免疫组化结果 |
| 3.7.4 Bax、Bcl-2和caspase-3 mRNA相对表达量 |
| 3.7.5 Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白相对表达量 |
| 讨论 |
| 1 尖叶假龙胆抗癌作用的理论依据 |
| 2 前期试验和实验中的一些问题 |
| 3 模型的选择 |
| 4 中药血清药理学实验方法探讨 |
| 4.1 中药血清药理学含义及优点 |
| 4.2 中药血清药理学存在的问题 |
| 5 指标方法选择及结果评价 |
| 5.1 EEGA诱导人肝癌Bel-7402细胞和荷瘤小鼠H22凋亡的作用 |
| 5.2 EEGA对荷瘤小鼠H22免疫的影响 |
| 5.3 EEGA抗肝癌的机制研究 |
| 6 问题与展望 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 攻读博士学位期间发表论文 |
| 个人简历 |
（10）蛹虫草子实体胶囊对S180小鼠抗肿瘤作用的实验研究（论文提纲范文）
| 1 材料 |
| 1. 1 药品与试剂 |
| 1. 2 实验动物与瘤株 |
| 1. 3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2. 1 剂量配制依据 |
| 2. 2 裸鼠移植S180模型建立及动物分组 |
| 2. 4 指标检测和结果评价 |
| 2. 5 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3. 1 蛹虫草子实体胶囊对S180实体瘤小鼠肿瘤重量和胸腺的影响 |
| 3. 2 蛹虫草子实体胶囊对S180实体瘤小鼠的血清NSE的影响 |
| 3. 3 蛹虫草子实体胶囊对S180实体瘤小鼠的血清CEA的影响 |
| 3. 4 蛹虫草子实体胶囊对S180实体瘤小鼠的血清CA72-4 的影响 |
| 4 讨论 |
四、康莱胶囊对荷瘤小鼠抗肿瘤作用的实验研究（论文参考文献）
- [1]艾可清颗粒减轻环磷酰胺心脏毒性的作用及机制研究[D]. 钟鹏程. 广州中医药大学, 2021(02)
- [2]白英总碱抗NSCLC的物质基础和作用机制及临床前安全性研究[D]. 杜肖. 中国中医科学院, 2020(01)
- [3]荸荠皮和浒苔的化学成分及其抗肿瘤、抗菌活性研究[D]. 徐小净. 东南大学, 2019(05)
- [4]复方白花蛇舌草胶囊抗肿瘤作用的初步研究[J]. 覃明雄,陈洪涛,蔡丹昭,刘源焕,罗宇东,李芳婵. 广西中医药, 2019(02)
- [5]长白山刺五加多糖开发的药理基础研究[D]. 孟庆龙. 吉林农业大学, 2018(03)
- [6]当归红芪超滤物辅助12C6+重离子束治疗肝癌减毒增效实验研究[D]. 刘凯. 兰州大学, 2017(07)
- [7]壮药癌痛消胶囊干预肝癌（H22）荷瘤小鼠的实验研究[J]. 黄鑫,黎丽,何俊炜. 中国民族医药杂志, 2017(02)
- [8]正元胶囊防治癌因性疲乏的疗效及机制研究[D]. 关洁珊. 广州中医药大学, 2016(07)
- [9]尖叶假龙胆醇提物对H22荷瘤小鼠及人肝癌Bel-7402细胞的影响和机制研究[D]. 芦冲. 黑龙江中医药大学, 2016(05)
- [10]蛹虫草子实体胶囊对S180小鼠抗肿瘤作用的实验研究[J]. 董祺,高志惠. 山东科学, 2016(02)