一、癸水清对5/6肾切除大鼠内皮素、血管紧张素Ⅱ的影响（论文文献综述）
郭传[1]（2020）在《益肾缓衰方调控IS/AhR/NOX4通路改善动脉粥样硬化性肾病的机制研究》文中进行了进一步梳理背景动脉粥样硬化性肾病（atherosclerotic renal disease,ARD）是指因动脉粥样硬化引起肾动脉狭窄和血流量减少,而导致的肾脏损伤,是引起终末期肾脏病（end stage renal disease,ESRD）的主要原因。随着肾灌注的不断减少,肾小管周围微血管内皮逐渐受损,呈现稀疏化,“微血管荒废—小管间质纤维化”的病理链逐渐形成,这是ARD进展的关键病理环节。目前针对ARD的治疗,主要包括药物治疗与血管重建术,以控制血压、血脂、减少心血管事件发生概率和保护肾功能,但是治疗的效果并不理想,疾病的肾脏终点并未得到改善。这也提示临床工作者在ARD的治疗过程中,应积极寻找新的干预措施和治疗靶点,如选择决定ARD患者肾脏预后的小管间质纤维化作为切入点。研究发现,当小管间质微血管受到损伤时,小管间质纤维化的速度可以明显加快,因此从保护小管间质微血管内皮的角度,探寻延缓ARD小管间质纤维化的措施具有重要意义。硫酸吲哚酚（indoxyl sulfate,IS）作为一种肠源性尿毒症毒素,由肠道微生物分解色氨酸并经肝脏转化而成,主要通过肾脏清除。当肾功能下降时,IS在体内明显蓄积,因为其易与蛋白质结合,而不易被透析清除。IS可通过活化芳香烃受体（Aryl hydrocarbon receptor,AhR）,并进一步激活烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酶氧化剂-4（Nicotinamide adenine dinucleotide phosphatase oxidase 4,NOX4）,诱导氧化应激和炎症反应,导致内皮功能障碍,引起微血管荒废,加速小管间质纤维化。因此,在IS刺激条件下,AhR/NOX4通路激活并介导的的氧化应激和炎症反应,可能是ARD进展中小管间质微血管损伤的主要机制,从而加重了小管间质纤维化。本课题组基于既往的证候学研究和临床经验,考虑ARD的基本病机以脾肾气虚为本,湿、浊、瘀、毒夹杂为标。知名肾病专家戴希文教授结合多年治疗慢性肾脏病的临床经验,提出了益气活血、利湿降浊解毒的益肾缓衰方,与ARD的基本病机相吻合,在延缓ARD肾功能进展方面具有一定的临床疗效。益肾缓衰方相关的基础研究提示,该方在保护血管内皮和改善小管间质纤维化方面具有重要作用。鉴于IS与中医“浊毒”致病特点类似,且IS可通过活化AhR,激活NOX4,进而损伤血管内皮,因此可以考虑益肾缓衰方对小管间质微血管的保护作用可能与该方抑制IS的毒性作用有关,并提出“益肾缓衰方可能通过调控IS介导下的AhR/NOX4通路,改善微血管荒废,减轻小管间质纤维化,从而延缓ARD进展”的假说。围绕此假说,本研究首先对ApoE基因敲除小鼠使用高脂饮食喂养联合5/6肾切除构建ARD模型,观察益肾缓衰方对ARD小鼠血清IS水平、小管间质微血管损伤、小管间质纤维化以及AhR/NOX4通路相关分子表达水平和下游氧化应激、炎症分子变化的影响。其次,采用IS刺激人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）构建毒素损伤细胞模型,观察益肾缓衰方含药血清对IS诱导下HUVECs活力、衰老和氧化应激以及AhR/NOX4通路的的影响,旨在从IS角度出发,阐述益肾缓衰方对ARD间质微血管的保护作用和机制,为该方延缓ARD小管间质纤维化提供一定的理论依据。目的1.观察益肾缓衰方对ARD小鼠血清IS水平的变化、小管间质纤维化以及小管周围微血管内皮损伤的影响,以及该方对IS诱导下血管内皮细胞损伤的保护作用。2.从IS激活AhR/NOX4通路,并诱导氧化应激和炎症反应角度,揭示益肾缓衰方对ARD小管间质微血管的保护作用和机制,为该方延缓ARD小管间质纤维化提供一定的理论依据。方法1.体内实验:通过对ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠使用高脂饮食喂养联合5/6肾切除构建ARD模型。实验分为:对照组、假手术组、模型组、益肾缓衰方低剂量组（16.76g/kg.d）、益肾缓衰方中剂量组（33.52g/kg.d）、益肾缓衰方高剂量组（67.04g/kg.d）、爱西特组（0.4g/kg.d）,干预20周。观察小鼠一般情况,并利用自动生化仪检测小鼠肾功能（Scr、BUN）和血脂水平变化（TC、TG、LDL-c）,高效液相色谱-荧光法测血清IS水平、Elisa法测氧化应激指标（SOD、MDA）及小鼠血清内皮功能障碍指标（ADMA）水平、HE染色和VG染色判断肾动脉的动脉粥样硬化程度,HE染色、PAS染色、Masson染色判断肾组织的组织形态学变化及间质胶原沉积,电镜观察肾脏的超微结构,免疫组化检测小鼠间质纤维化相关指标（Collagen Ⅳ、α-SMA、TGF-β1）、AhR蛋白及肾间质内微血管内皮保护指标（vWF）表达水平,real time PCR检测小鼠肾组织内AhR/NOX4通路相关分子（AhR、NOX4、MCP-1）以及间质纤维化相关指标（TGF-β1）的mRNA表达水平。2.体外实验:采用500μmol/LIS刺激HUVECs 24h建立内皮损伤的毒素模型。首先,通过 CCK-8 法检测不同浓度 IS（0μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L）刺激后HUVECs活力变化及不同浓度益肾缓衰方含药血清（5%、10%、20%）对IS刺激下HUVECs活力的影响,同时确定IS的造模浓度和含药血清的干预浓度。其次,将实验分为:空白对照组、含药血清对照组、毒素模型组和含药血清实验组,并通过SA-β半乳糖苷酶法检测各组细胞衰老程度、化学荧光微孔板法检测各组细胞ROS生成量。最后,增加AhR抑制剂组（CH223191）及AhR抑制剂+含药血清组,并进一步检测各组细胞的细胞活力、细胞衰老情况、ROS生成量,并通过Western blot检测AhR与NOX4的蛋白表达,real time PCR法检测AhR、NOX4及炎症因子MCP-1的mRNA表达。结果1.体内实验:（1）与对照组比,假手术组小鼠体重虽增加,但无统计学意义（P>0.05）;血清TC、TG、LDL-c水平明显升高（P<0.05）,血清SOD活性明显下降（P<0.05）,但血清Scr、BUN、IS水平、MDA及ADMA含量升高均不明显（P>0.05）;肾动脉内膜增厚、管腔狭窄,肾小管扩张,肾小管超微结构未见明显异常,肾间质胶原纤维沉积不明显（P>0.05）;肾间质内TGF-β1、Collagen Ⅳ、α-SMA、AhR蛋白表达水平未见明显增加（P>0.05）,肾间质内vWF蛋白表达水平下降（P<0.05）;肾组织内AhR、TGF-β1及NOX4 mRNA表达水平的变化无统计学差异（P>0.05）,但MCP-1 mRNA表达水平增加,有统计学意义（P<0.05）。（2）与对照组比,模型组小鼠体重无明显差异（P>0.05）;Scr、TC、TG、LDL-c和血清IS水平显着升高（P<0.05）;血清SOD活性下降而MDA、ADMA含量增加（P<0.05）;肾动脉内膜增厚、管腔狭窄,肾小球硬化,肾小管空泡样变性、腔内微绒毛稀疏和缺失,且小管间质纤维化明显;肾间质胶原纤维沉积明显增加（P<0.05）;肾间质vWF蛋白表达水平下调而CollagenⅣ、α-SMA、TGF-β1及AhR蛋白表达水平增加（P<0.05）;肾组织内AhR、NOX4、TGF-β1及MCP-1 mRNA表达水平增加（P<0.05）。（3）与假手术组比,模型组小鼠体重平均水平较假手术组低,但仅在饮食干预8周时显示有统计学差异（P<0.05）;血清Scr、IS、MDA及ADMA水平更高（P<0.05）,而血脂水平及SOD活性无明显差异（P>0.05）;肾动脉内膜增厚及管腔狭窄程度更加明显,肾小球硬化更加明显,腔内微绒毛稀疏和缺失,肾间质胶原纤维沉积更加明显（P<0.05）;肾间质 Collagen Ⅳ、α-SMA、TGF-β1、AhR及 vWF 蛋白表达水平明显增加（P<0.05）;肾组织内TGF-β1、AhR、NOX4及MCP-1 mRNA表达水平增加更加明显（P<0.05）。（4）与模型组比较,益肾缓衰方低剂量、中剂量组,对小鼠体重影响不明显（P>0.05）,高剂量组和爱西特组在干预20周时,体重明显低于模型组（P<0.05）;益肾缓衰方低、中、高剂量组及爱西特组均可显着降低小鼠血清Scr和血清IS水平（P<0.05）,但对BUN及血脂水平的改变均不明显（P>0.05）;益肾缓衰方低剂量组可明显增加小鼠血清SOD活性、降低小鼠血清MDA和ADMA含量（P<0.05）,中剂量和高剂量组可明显降低小鼠血清MDA（P<0.05）,爱西特组可明显增加小鼠血清SOD活性并降低小鼠血清MDA含量（P<0.05）;益肾缓衰方低、中、高剂量组均可在一定程度改善肾动脉内膜增厚情况、肾小管空泡样变性以及肾小管的超微结构,但仅低剂量组可明显减轻肾间质胶原纤维沉积（P<0.05）;益肾缓衰方低剂量组和中剂量组均可明显减少肾间质Collagen Ⅳ、α-SMA、AhR蛋白表达,并增加肾间质vWF蛋白的表达（P<0.05）;益肾缓衰方低剂量组和中剂量组均可明显减少肾组织AhR、NOX4、MCP-1 mRNA的表达水平（P<0.05）,且益肾缓衰方低剂量组对于减少肾组织内TGF-β1蛋白和mRNA的表达量,均具有统计学差异（P<0.05）。益肾缓衰方高剂量组和爱西特组对肾组织Collagen Ⅳ、α-SMA、TGF-β1、AhR和vWF的蛋白表达及TGF-β1、AhR、NOX4及MCP-1的mRNA表达无统计学差异（P>0.05）。2.体外实验:（1）与 0μmol/LIS 组比,500μmol/LIS 组与 1000μmol/LIS 组在干预24h、48h、72h后,均可以显着降低HUVECs活力（P<0.05）,250μmol/L IS组在干预48h时可显着降低HUVECs活力（P<0.05）,但1000μmol/LIS干预后细胞数目呈下降趋势。（2）与同等浓度的正常大鼠血清组比,在IS刺激条件下,10%和20%的含药血清可显着增加细胞活力（P<0.05）;在无IS刺激条件下,5%和10%含药血清组对细胞活力无明显影响（P>0.05）,20%的含药血清可显着增加细胞活力（P<0.05）。（3）与空白对照组比较,含药血清对照组对细胞活力、细胞衰老、ROS生成及AhR和NOX4的蛋白和mRNA表达均无显着影响（P>0.05）。（4）与空白对照组比,毒素模型组的细胞活力下降、衰老细胞染色率增加及ROS相对生成量增加（P<0.05）,细胞核内AhR蛋白及NOX4蛋白表达增加,AhR、NOX4及MCP-1的mRNA表达增加（P<0.05）。（5）与毒素模型组比较,含药血清实验组、AhR抑制剂组、AhR抑制剂+含药血清组均可明显增加细胞活力、降低衰老细胞染色率及ROS相对生成量（P<0.05）,下调AhR蛋白及NOX4蛋白表达水平,下调AhR、NOX4及MCP-1的mRNA表达水平（P<0.05）。（6）与AhR抑制组比,AhR抑制剂+含药血清组在增加细胞活力、降低衰老细胞染色率及ROS相对生成量,以及下调AhR蛋白及NOX4蛋白表达水平和AhR、NOX4及MCP-1的mRNA表达水平方面效果更加显着（P<0.05）。结论1.益肾缓衰方可改善ARD小鼠肾功能以及肾动脉和肾组织的病理形态学损伤,减轻小鼠肾间质纤维化,从而延缓ARD进展。2.益肾缓衰方可通过降低ARD小鼠血清IS水平并改善ARD模型小鼠体内IS对血管内皮的损伤,改善小管间质微血管荒废,进而减轻小管间质纤维化。3.益肾缓衰方能够改善ARD小鼠小管间质微血管荒废和IS诱导的人脐静脉内皮细胞的损伤,机制可能与该方抑制IS诱导下AhR/NOX4通路的激活,进而改善下游的氧化应激和炎症反应有一定的关系。
周珊珊[2]（2020）在《桃核承气汤抗肾脏纤维化的药效物质基础及作用机制研究》文中研究表明目的:桃核承气汤是《伤寒论》经典名方,临床上加减广泛用于慢性肾脏疾病的治疗。目前关于桃核承气汤的研究多集中在临床疗效研究方面,而其药效物质基础及作用机理研究十分缺乏。本研究建立在临床疗效确切的基础上,结合循证医学、中药化学、生物信息学、中药药理学、分子生物学及分析化学等多学科交叉的研究方法,对桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭进行了Meta分析,筛选了该方抗肾脏纤维化的有效物质部位,分析鉴定了有效物质部位的主要化学成分,最后基于网络药理学研究,对有效物质部位进行了抗肾脏纤维化的体内外作用机制研究。系统地对桃核承气汤进行了临床疗效评价、物质基础研究及药效作用机制研究,从而为该方的进一步开发利用奠定研究基础和提供科学依据。方法:1桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭的Meta分析通过检索中国知网（CNKI）数据库、中文科技期刊全文（维普,VIP）数据库、万方医学网（Wangfang）数据库和中国生物医学（CBMdisc）数据库、Pub Med、EMbase和Medline数据库,检索年限至2020年1月。以桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭的随机对照试验（RCTs）,按Cochrane系统评价的方法评价纳入研究的质量,由两位评价人员独立按照纳入与剔除标准筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险,并用Review Manger 5.3软件对纳入文献结果进行Meta分析。2桃核承气汤各极性部位的提取分离采用系统溶剂萃取法,将方中桃仁、大黄、桂枝、甘草混合用70%乙醇,回流提取2次,分别为2h和1.5h,减压浓缩后将醇提液挥发至无醇味。分别用不同极性的溶剂进行萃取,最后依次得到石油醚萃取物质部位,氯仿萃取物质部位,乙酸乙酯萃取物质部位,正丁醇萃取物质部位,将其进行减压浓缩干燥后备用,芒硝作为一个单独的部位。3桃核承气汤抗肾脏纤维化有效物质部位的筛选研究采用转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导HK-2细胞构建体外肾纤维化模型,用桃核承气汤各萃取物质部位以不同浓度干预细胞。Elisa试剂盒检测细胞上清液胶原蛋白Iα1（COLIα1）,纤维粘连蛋白（FN）含量;利用CCK-8法确定筛选出的有效物质部位的最佳浓度;Western blot检测胶原蛋白Ⅰ（Co L-Ⅰ）,胶原蛋白Ⅲ（Co L-Ⅲ）,基质金属蛋白酶-2（MMP2）,基质金属蛋白酶抑制因子-2（TIMP2）,结缔组织生长因子（CTGF）蛋白的表达水平;免疫荧光染色法检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达;Real time-PCR检测纤溶酶原激活抑制剂-1（PAI-1）m RNA的表达。4桃核承气汤正丁醇有效物质部位的化学成分研究使用Welch Ultimate TM uplc XB-C18 column（100 mm×2.1mm,1.8μm）分析色谱柱;流动相A为水（含0.1%甲酸）,流动相B为色谱乙腈;梯度洗脱程序:025min,5%B;2565min,95%B;柱温:40℃;流速:0.3ml/min;进样体积:2μL;吸收波长为210nm。离子源为电喷雾电离源,采用高分辨率质谱测定正离子模式和负离子模式,氮气流速800L/h,气体温度200℃,毛细管电压30k V,扫描范围m/z 50-1500。5桃核承气汤正丁醇有效部位抗肾脏纤维化的网络药理学研究通过TCMSP数据库获取桃核承气汤正丁醇有效物质部位的26个化合物的OB、DL值,以OB≥30%和DL≥0.18为阈值筛选潜在的活性成分。将筛选出的化合物导入到SEA、SIB数据库获取化合物靶标,从Dis Ge Net数据库和NCBI数据库收集疾病靶标,将化合物靶标和疾病靶标整合得到化合物潜在治疗靶标。将治疗靶标导入String数据库获取关键蛋白相互作用（PPI）信息。利用Cytoscape软件中的Clue Go Version 2.5.4插件进行KEGG通路富集分析;利用DAVID Version 6.8进行GO功能富集分析。利用Cytoscape Version 3.6.0软件构建PPI网络、活性成分-靶标网络、活性成分-靶标-信号通路网络。6桃核承气汤正丁醇有效物质部位抗肾脏纤维化的作用机制研究（1）体外实验:TGF-β1诱导HK-2细胞构建体外肾纤维化模型。CCK8法检测桃核承气汤正丁醇萃取物质部位对HK2细胞活力的影响;Western blot检测α-SMA、E-cadherin、FN以及PI3K/AKT/m TOR和HIF-1α/VEGF信号通路相关蛋白的表达;免疫荧光检测α-SMA、Ecadherin、FN和TNF-α的表达;鬼笔环肽染色观察细胞中F-actin微丝蛋白。（2）体内实验:采用单侧输尿管结扎术构建UUO大鼠肾纤维化模型,将36只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为3组,假手术组（Sham）,模型组（UUO）,桃核承气汤正丁醇有效物质部位组（NE-THCQ）。观察大鼠一般情况,分别于术后7天、14天分批次处死大鼠、采集血液制备血清标本,摘取肾脏。检测血清肌酐、尿素氮水平;H&E染色、Masson染色和透射电镜观察大鼠肾脏病理改变;Elisa试剂盒检测大鼠血清中IL-6、IL-1β的含量;免疫组化检测Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA和E-cadherin的表达;Western blot检测PI3K/AKT/m TOR和HIF-1α/VEGF信号通路相关蛋白的表达。结果:1桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭的Meta分析纳入8篇文献,共630例患者,其中治疗组321例,对照组309例。Meta分析显示,与对照组相比,桃核承气汤加减联合用药能改善CRF患者症状的总有效率[OR=4.89,95%CI为[3.28,7.29]];降低血尿素氮（BUN）[SMD=-0.62,95%CI为[-0.81,-0.43]]和血肌酐（Scr）[SMD=-3.12,95%CI为[-4.72,-1.52]];升高肌酐清除率（Ccr）[SMD=-0.56,95%CI为[-0.34,-077]],肾小球滤过率（e GFR）[SMD=0.62,95%CI为[0.30,0.94]]和血红蛋白（Hb）[SMD=-0.71,95%CI为[0.39,1.03]]。2桃核承气汤抗肾脏纤维化有效物质部位的筛选研究乙酸乙酯、正丁醇、氯仿萃取物质部位在200、400mg/m L浓度下能显着降低COLIα1和FN含量,CCK8法筛选出最佳干预浓度为200mg/m L。乙酸乙酯、正丁醇、氯仿萃取物质部位均能降低Co L-Ⅰ,Co L-Ⅲ,TIMP2、CTGF、α-SMA表达,上调MMP2的表达,其中正丁醇萃取物质部位作用效果最为显着（P<0.01）。实时荧光定量检测发现,乙酸乙酯、正丁醇、氯仿萃取物质部位均能抑制PAI-1m RNA的表达,且正丁醇部位最为显着（P<0.01）。3桃核承气汤正丁醇有效物质部位的化学成分研究初步鉴定出桃核承气汤正丁醇有效物质部位中可能的26个化合物,其中2个来自桃仁,1个来自桂枝,8个来自大黄,15个来自甘草。主要为皂苷,黄酮,萜类化合物。4桃核承气汤正丁醇有效部位抗肾脏纤维化的网络药理学研究筛选出7个潜在活性化合物,得到活性成分靶标484个,潜在治疗靶标118个。通过活性成分-靶标网络发现,7,2’,4’-三羟基-5-甲氧基-3-苯基香豆素度值最高,表明其潜在治疗靶点最多,其余依次为甘草苷E、常春藤皂苷元、β-谷甾醇、甘草苷、没食子酸-3-O-（6`-O-没食子酰）葡萄糖苷、18α-羟基甘草次酸。在PPI网络中前16个关键靶标依次是ALB、IL6、AKT1、VEGFA、MAPK3、EGFR、TNF、CASP3、SRC、PTGS2、MAPK8、FN1、MMP9、JUN、KDR、IL1B。GO富集分析结果显示NE-THCQ主要影响细胞增殖、凋亡和细胞内信号级联。KEGG富集分析结果显示PI3K-AKT信号通路富集靶点最多,关联性最强,此外富集的前20条通路中,MAPK、TNF、Ras、HIF-1、NOD-like receptor、Toll-like receptor、VEGF、m TOR等信号通路均直接或间接参与了肾纤维化过程。5桃核承气汤正丁醇有效物质部位抗肾脏纤维化的作用机制研究（1）体外研究:CCK8法筛选出药物干预浓度为200mg/ml,孵育时间为12h、24h、48h时对细胞活力不产生影响。NE-THCQ能显着降低α-SMA和FN表达,并上调了E-cadherin,在48h作用最为显着（P<0.01）;显着抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞TNF-α的表达（P<0.01）和F-actin蛋白的重排;抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路磷酸化蛋白的表达,显着下调TGF-β1诱导的HK-2细胞中p-PI3K/PI3K（P<0.01）、p-m TOR/m TOR和p-AKT/AKT的比值（P<0.05）;显着抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞中HIF-1α（P<0.01）和VEGF的表达（P<0.05）。（2）体内研究:NE-THCQ能改善UUO大鼠肾脏形态病理学改变;降低血肌酐、尿素氮的水平（P<0.01）;显着减少血清IL-6、IL-β1的含量（P<0.01）;显着抑制Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和α-SMA的表达,上调E-cadherin的表达（P<0.05或P<0.01）;抑制UUO大鼠肾组织中PI3K/AKT/m TOR信号通路磷酸化蛋白的表达,显着下调p-PI3K/PI3K、p-m TOR/m TOR（P<0.05）和p-AKT/AKT的比值（P<0.01）;显着抑制UUO大鼠肾组织中HIF-1α和VEGF的表达（P<0.01）。结论:1桃核承气汤加减辅助治疗CRF,较西药单纯治疗能提高临床疗效、改善肾功能、提高患者生存状态,但纳入文献的数量和质量有限,相关结论有待进一步验证。2初步筛选出桃核承气汤的有效物质部位群,分别为氯仿萃取物质部位,乙酸乙酯萃取物质部位和正丁醇萃取物质部位,其中正丁醇萃取物质部位为活性最佳。3初步鉴定出桃核承气汤正丁醇有效物质部位的26个可能的化合物,筛选出7个潜在活性化合物,为进一步研究其药理机制奠定了基础。4通过网络药理学研究,推测桃核承气汤正丁醇有效物质部位可能是通过调节PI3K/AKT、m TOR、HIF、VEGF等信号通路,靶向炎症因子（如TNF、IL-6、IL-1β等）,影响ECM降解酶活性（如MMP1、MMP2、MMP3等）以及刺激相关信号因子的表达从而对炎症、缺氧、血管生成、ECM的合成和降解进行综合调控,以发挥其抗肾脏纤维化的作用。5通过体内外实验发现,PI3K/AKT/m TOR和HIF-1α/VEGF信号通路介导了肾纤维化的发生。NE-THCQ抗肾脏纤维化的作用机制可能与其调控PI3K/AKT/m TOR和HIF-1α/VEGF信号通路从而抑制肾小管上皮细胞骨架重排、逆转上皮细胞间充质转化（EMT）、抑制细胞外基质（ECM）合成与分泌、抑制炎症反应、改善肾功能以及适应缺氧损伤有关。
喻梦[3]（2019）在《尿毒清通过上调Klotho水平缓解5/6肾切除大鼠肾功能不全及肾脏纤维化》文中研究指明目的:慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）的患病率和死亡率逐年增高,已成为全球关注的重要公共卫生问题之一。Klotho是与CKD的发生及进展关系密切的基因,预防Klotho下降,再激活内源性Klotho产生或补充外源性Klotho能够减轻肾脏纤维化,延缓CKD进展,可作为CKD潜在的治疗靶标。尿毒清（uremic clear granules,UCG）是治疗CKD的有效中药复方制剂,具有多成分、多靶点、多途径协同作用的特点,药理机制复杂,有关的深入研究依然比较匮乏。本课题通过5/6肾切除法制备CKD大鼠模型,研究UCG对CKD大鼠肾功能及肾脏纤维化的作用及作用机制,探索UCG是否可能通过调节内源性Klotho的表达发挥药理作用,以完善UCG的药理机制。方法:随机将36只SD大鼠分成三组:假手术组（Sham组,行假手术）;模型组（Model组,5/6肾切除+高磷饮食）;尿毒清组（UCG组,5/6肾切除+高磷饮食组+尿毒清颗粒）;采用5/6肾切除法构建大鼠CKD模型,于术后2周、4周、8周、12周采血,检测各组大鼠血清生化指标:肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）;造模手术后12周取肾组织,一部分用于Western Blot及RT-PCR方法检测肾组织中Klotho、TGF-β 1、α-SMA、FN等蛋白和mRNA的表达量;另一部分行HE染色、Masson染色及免疫组织化学检测。结果:一般情况:模型组大鼠术后皮毛逐渐变得枯黄杂乱并且容易脱毛,精神萎靡,UCG组上述表现较轻;术后12周UCG组残余肾重和肾脏指数明显低于模型组（P<0.05）。肾脏外观:正常组大鼠的肾脏外表红润光滑,模型组大鼠残余肾脏明显增生肿大,表面苍白缺血,肾盂高度扩张（内有积尿）,UCG组有所改善。血清生化指标:术后2周造模的各组大鼠BUN及Scr显着增高,并且模型组BUN及Scr持续升高,尿毒清干预能够维持大鼠肾功能,给药10周后UCG组BUN及Scr水平显着低于模型组（P<0.001）。肾组织HE染色及Masson染色:造模大鼠肾脏组织不同程度的损害,UCG组肾脏病理损害情况相对模型组有所改善。病理图像定量分析:造模的各组大鼠肾脏组织病理学积分均显着高于假手术（P<0.001）;UCG组肾小球及肾小管的病理损害程度均低于模型组（P<0.05）。Western Blot及RT-PCR结果:UCG组Klotho的表达高于模型组（P<0.05）;UCG组TGF-β1、α-SMA、FN的表达水平低于模型组（P<0.05）。免疫组化结果:模型组大鼠肾组织Klotho表达降低,UCG能部分上调Klotho表达。结论:UCG能够改善5/6肾切除大鼠肾功能,减轻肾脏纤维化,延缓CKD进展;尿毒清可能通过上调保护性分子KLotho表达,下调肾损伤性分子TGF-β 1的表达,下调EMT相关分子α-SMA及FN表达,抑制肾小管上皮转分化,缓解肾脏纤维化。
杜少鹏[4]（2018）在《基于“脾主大腹”探讨健脾益气方调控PI3K/Akt/mTOR信号通路防治PD大鼠腹膜纤维化的机制研究》文中研究指明目的:揭示健脾益气方调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,干预间皮细胞间充质转分化进程进而防治PD相关性腹膜纤维化的分子机制。从分子水平上探索腹膜纤维化“脾气亏虚”的生物学本质及与腹膜间皮细胞转分化的密切联系。方法:75只SD雄性大鼠,体重范围在160g-200g,随机分成5组,每组15只,尿毒症大鼠模型建立一周后,除假手术组外,即刻进行腹膜透析,并联合LPS高糖诱导法腹腔注射。（1）健脾益气方组（高剂量中药组和低剂量中药组）:予健脾益气方颗粒冲水进行灌胃,晨间灌胃。（2）阿托伐他汀组:将该片剂研磨成粉,以有效剂量1.8mg/（kg·d）于腹膜透析开始之日,晨间灌胃。（3）模型组:于大鼠腹膜透析当日开始,予等体积蒸馏水,每天晨间灌胃一次。（4）假手术组:未做过5/6肾切除的大鼠,正常饲喂,不做任何干预。通过尾静脉抽血检测确定尿毒症大鼠模型建立成功,然后每日腹腔注射4.25%腹透液行腹透相关性腹膜纤维化造模,30天后,取每组大鼠的腹膜壁层组织,规格为1cm×1cm大小,通过HE染色观察腹膜厚度以及腹膜纤维化程度,电镜下观察腹膜间皮细胞形态变化,以及免疫荧光和Western blot法测定PI3K、pAKT、pmTOR、α-SMA、E-Cadherin蛋白的表达。结果:（1）病理:a.光镜在光镜下对经HE染色后的腹膜组织切片进行观察,假手术组由正常的扁平腹膜细胞所包被,呈连续分布的间皮细胞结构完整,且有较稀疏的结缔组织依附于腹膜间皮下面,结缔组织也未见增生。模型组与阿托伐他汀组、健脾益气方低剂量、高剂量组的腹膜组织与假手术对照组相比增厚明显,且质地疏松,并伴有间皮细胞的脱落。模型组的间皮细胞与纤维化组织界限模糊,在间皮下有大量纤维蛋白沉积,且比西药和中药干预组的腹膜组织更为明显。b.电镜其中假手术组的腹膜间皮细胞没有发生变形,且结构完整;胞内的细胞器等物质清晰可见;间皮细胞之间的连接较为紧密。与假手术组相比较模型组腹膜间皮细胞数量减少,多数已经脱落、变形,原有的结构被破坏,并发生纤维组织增生。西药组图中细胞结构较模型组完整,间皮细胞间的基质有一定积聚,细胞器等胞内组织结构清晰可见。中药低剂量组镜下观察其间皮细胞有脱落,部分与胞外基质融合,细胞绒毛偶见,胞内器官分界不明显。中药高剂量组腹膜纤维化程度明显轻微,细胞间联系较为紧密,基质增生不明显,胞内线粒体、内质网等细胞器分布较为明显,胞外纤维蛋白沉积较少。（2）免疫组织化学法:a.α-SMA、E-Cadherin的表达其中假手术组中α-SMA表达正常,而E-Cadherin呈高表达状态;模型组中α-SMA呈高表达状态,E-Cadherin的表达较低（P<0.05）。阿托伐他汀西药组、中药低剂量组、中药高剂量组中α-SMA表达均较模型组的表达降低,与之相反E-Cadherin的表达均较模型组的增加（P<0.05）。中药高剂量组α-SMA表达较中药低剂量组和西药组均降低（P<0.05）;中药高剂量组E-Cadherin的表达较中药低剂量组和西药组均增加（P<0.05）。b.PI3K、pAKT、pmTOR的表达其中假手术组中PI3K、pAKT、pmTOR表达较低;模型组中PI3K、pAKT、pmTOR的表达则明显增强（P<0.05）。阿托伐他汀西药组、中药低剂量组、中药高剂量组中PI3K、pAKT、pmTOR的表达较模型组明显减弱（P<0.05）。中药高剂量组PI3K、pAKT、pmTOR表达较中药低剂量组和西药组均降低（P<0.05）.（3）免疫印迹法:模型组中的pAKT和pmTOR表达明显高于假手术组;而阿托伐他汀组、中药高剂量组和中药低剂量组中的pAKT和pmTOR表达较模型组明显减少;其中pAKT和pmTOR中的中药高剂量组的表达较西药组和中药低剂量组明显降低（P<0.05）。结论:（1）经实验证实,激活并上调介导腹膜间皮细胞损伤的PI3K/Akt/mTOR信号通路是参与间皮细胞EMT以及腹膜纤维化的主要机制之一。（2）健脾益气汤能够上调E-cadherin表达,抑制α-SMA以及PI3K/Akt/mTOR信号通路的表达,进而抑制腹膜间皮细胞EMT进程,并且能够减轻腹膜增厚程度、改善腹膜功能,最终起到拮抗腹膜纤维化作用。
褚瑜光[5]（2017）在《盐敏感性高血压患者血清“Ghrelin-生长激素信号系统”蛋白表达与中医证候学相关性研究》文中研究表明盐敏感性高血压是原发性高血压中特殊的一类,以高盐饮食为血压升高的诱因,高盐后血压升高明显,并表现出机体对盐的不耐受及钠的代谢障碍。同时伴有组织器官的较重的损害,研究提示这种损害往往在血压升高之前就已经存在。因此盐敏感性高血压是一类有明确特殊发病机制高血压。在中医临床角度这一类盐敏感性高血压患者通常证候特点突出,并且证候演变及转归有一定相似性。因此从盐敏感性高血压的临床规律研究出发,一方面对盐敏感性高血压的发病机制展开生物信息学研究。另一方面对中医临床症状进行中医证候学研究,归纳出最突出、最常见、最能体现其病机特点的证候,然后对主要证候的临床规律及可能的物质基础进行深入研究。1目的:1.1通过对盐敏感性高血压临床特点进行研究,并对盐敏感性高血压Ghrelin-生长激素信号系统差异蛋白表达进行生物信息学分析,试图寻找盐敏感性高血压可能的发病机制。1.2通过对盐敏感性高血压中医证候特点及分布进行研究,总结出盐敏感性高血压中医证候特点,并通过临床特征分析及Ghrelin-生长激素信号系统差异蛋白表达的生物信息学研究,探索盐敏感性高血压中医证候学的客观物质基础。2方法:2.1盐敏感性高血压临床特征研究:分别运用动态血压对盐敏感性高血压血压进行评价;动态心电图心率变异性对盐敏感性高血压自主神经张力进行评价;肾小球滤过率及尿微量蛋白对肾脏损害进行评价;血清肾素、血管紧张素Ⅱ、血管紧张素Ⅰ、醛固酮对肾素血管紧张素系统进行评价;胰岛素敏感指数对胰岛素抵抗进行评价;彩色多普勒超声对心功能及颈动脉硬化进行评价;并对血生化、血常规、甲状腺功能等临床理化指标进行研究。2.2盐敏感性高血压中医证候研究:运用流行病学方法,对临床中医症状、体征运用量表进行全面采集。对证候量表进行整理,整理过的信息进行统计分析,首先通过因子分析对信息进行降维,降维出能充分解释整体差异的几个公因子,并对公因子进行中医的证候要素、病位脏腑的归纳。然后对公因子进行聚类将相似的证候要素进行再次降维,并结合中医理论归纳出主要的临床证候分型。最后对盐敏感性高血压各中医证候组间临床信息进行研究。2.3盐敏感性高血压“Ghrelin-生长激素信号系统”蛋白表达实验研究:随机选取盐敏感性高血压36例（其中3个中医证候组各12例）、非盐敏感性高血压30例、正常体检人员16例血清Ghrelin、Obestatin运用Ghrelin/Obestatin酶联免疫试剂盒进行检测;随机选取敏感性高血压15例（其中脾肾阳虚、水饮内停组6例,痰湿壅盛组5例,阴虚阳亢组4例）、非盐敏感性高血压15例、正常体检人员6例。运用QAH-GF-1蛋白芯片对生长因子信号系统40个蛋白因子进行定量研究。2.4统计学方法:数据采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析,计数资料采用卡方检验;计量资料用均数土标准差（X士SD）表示;p≤0.05为差异有统计。多组间计量资料比较时,满足方差齐性采用单因素方差分析;若方差不齐则采用Kruskal秩和检验;采用Microsoft exce12014软件绘制图。证候学研究采用因子分析及R型系统聚类进行统计。3结果:3.1盐敏感性高血压相关临床特征研究结果3.1.1盐敏感性高血压病程结果:盐敏感性高血压患者患病病程明显长于非盐敏感性高血压患者,二者差异显着。3.1.2盐敏感性高血压体重指数结果:盐敏感性高血压BMI、腹围、颈围明显高于非盐敏感性高血压及正常组;臀围明显高于正常组。非盐敏感性高血压BMI、颈围明显高于正常组。3.1.3 盐敏感性高血压血压结果:24hASBP、DASBP、NASBP、24hADBP、NADBP、24h APP、NAPP、24HSBPV、DSBPV、NSBPV、24HDBPV、NDBPV、24SBPL、DSBPL、NSBPL、24DBPL、NDBPL:盐敏感性高血压组>非盐敏感性高血压组,差异显着;NSBPRR、NDBPRR盐敏感性高血压组<非盐敏感性高血压组,差异显着;3.1.4盐敏感性高血压心率变异性结果:盐敏感性高血压平均心率、24H总心率均明显高于非盐敏感性高血压组;盐敏感性高血压组SDNN、SDANN、SDSD、三角指数、RMSSD、Pnn50均明显低于非盐敏感性高血压组3.1.5盐敏感性高血压肾脏功能相关指标结果:盐敏感性高血压患者GFR明显低于非盐敏感性高血压及正常组,而非盐敏感性高血压患者与正常人无差异。尿微白蛋白、α微球蛋白、尿蛋白肌酐比:盐敏感性高血压组>非盐敏感性高血压组>正常组;尿免疫球蛋白盐敏感组明显高于另外两组,差异显着;尿NAG酶,组间无差异。3.1.6盐敏感性高血压胰岛素敏感指数结果:盐敏感性高血压胰岛素敏感指数显着低于非盐敏感性高血压及正常组,而非盐敏感性高血压与正常组无差异。3.1.7盐敏感性高血压血清AngⅠ、AngⅡ、ALD、PRA水平结果:AngⅡ:盐敏感性高血压组>非盐敏感性高血压组>正常组,且两两比较差异显着;ALD:盐敏感高血组明显高于非盐敏感及正常组,差异显着;PRA:正常组明显低于另外两组,差异显着;AngⅠ组间差异不显着。3.1.8盐敏感性高血压血脂水平结果:CHO:盐敏感性高血压及非盐敏感总胆固醇水平明显高于正常组,二者之间差异不显着;TG:盐敏感性高血压>非盐敏感性高血压>正常组,差异显着;HDL-C:盐敏感性高血压明显低于非盐敏感性高血压及正常组;LDL-C:盐敏感性高血压及非盐敏感性高血压明显高于正常组,而二者之间差异不显着;ApoAl:盐敏感性高血压明显低于正常组,而与非盐敏感性高血压无差异;ApoB:组间无差异;ApoB/ApoAl:盐敏感性高血压明显高于正常组,差异显着。3.1.9盐敏感性高血压血清主要离子水平结果:正常组K、Mg明显高于盐敏感性高血压及非盐敏感性高血压;盐敏感组Na明显高于非盐敏感性高血压及正常组。3.1.10盐敏感性高血压血清皮质醇及同型半胱氨酸水平结果:C0R:盐敏感性高血压>非盐敏感性高血压>正常组;HCY:盐敏感性高血压>非盐敏感性高血压>正常组,均差异显着。3.1.11盐敏感性高血压生化及血常规相关指标结果:BUN:盐敏感性高血压>非盐敏感、正常组;UA:盐敏感性高血压>非盐敏感>正常组;TP、ALB、GLB:正常组>盐敏感性高血压、非盐敏感,差异显着。盐敏感性高血压HB、HCT、MCV均低于非盐敏感性高血压及正常组,差异显着。3.1.12盐敏感性高血压心脏超声指标结果:盐敏感性高血压患者室间隔、左室后壁厚度大于非盐敏感性高血压及正常组,差异显着;盐敏感性高血压EF%、FS%高于非盐敏感性高血压及正常组,差异显着;E/A:正常组>非盐敏感性高血压>盐敏感性高血压。3.1.13盐敏感性高血压颈动脉超声指标结果:盐敏感性高血压组颈动脉内膜厚度明显高于正常组;而且颈动脉斑块阳性率盐敏感性高血压组也是明显高于非盐敏感组及正常组。3.2盐敏感性高血压中医证候研究结果根据131份中医临床症状量表的信息,经过症状整理,删除低频症状,对59个主要症状进行分析。因子分析共降维出5个公因子,按照因子得分高低将盐敏感性高血压患者进行分类,然后统计各公因子所包含的病例数及百分比,其中因子1占18.32%、因子2占21.37%、因子3占20.43%、因子4占20.61%、因子5占22.14%。病位脏腑所占结构比:脾21.37%、肾17.56%、、肝脾18.32%、脾肾42.75%。证素:阴虚18.32%、痰湿21.37%、气滞39.69%、气虚42.75%、水饮 20.61%、阳虚 60.31%、精亏 17.56%、气陷 17.56%、热 21.37%、气逆 21.37%。辨证分型:阴虚阳亢18.32%、痰湿壅盛21.37%、脾肾阳虚20.43%、阳虚水泛20.61%。然后对公因子进行聚类分析:因子3/4/5被聚类成一类,最后聚类成3大类:脾肾阳虚、水饮内停证（60.31%）,阴虚阳亢证（18.32%）,痰湿壅盛证（21.37%）。然后对三个证候组间临床理化指标进行比较,结果显示三个证候组间在血压程度、交感神经张力、肾素血管紧张素活性、胰岛素抵抗程度、肾脏损害程度、心脏功能损害程度、颈动脉硬化程度均存在显着差异。3.3“Ghrelin-生长激素信号系统”蛋白表达实验研究:3.3.1盐敏感性高血压Ghrelin、Obestatin研究结果:盐敏感性高血压组血清Ghrelin水平明显低于正常人,并且明显低于非盐敏感性高血压患者。而非盐敏感性高血压患者与正常人比较则没有明显差异。Obestatin组间无差异。3.3.2盐敏感性高血压蛋白芯片研究结果:三组间经方差分析盐敏感性高血压升高的生长因子为 IGFBP-3、EG-VEGF、GDNF、IGFBP-2、GH、NT-4、PDGF-AA、PIGF、SCF R、VEGF R2、VEGF R3、VEGF-D、MCSF R 升高,降低的生长因子为AR、HGF。3.3.3盐敏感性高血压差异蛋白生物信息学研究结果:基因本体（Gene Ontology,GO）生物信息数据库的结构分析进行功能分析及KEGG生物信息数据库进行生物信息通路（PATH WAY）研究。结果显示,盐敏感性高血压由生长因子参与的多条可能的病机通路。分别是:酪氨酸磷酸化信号转导网络（PTP peptidyl-tyrosine phosphorylation）、生长因子信号通路（growth factor activity）、丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen activated protein kinase,MAPK）、磷醋酰肌醇3激酶/丝/苏氨酸激酶（PI3K/Akt phosphoinositide-3-kinase/serine threonine kinase）;Ras 信号通路（Ras signaling pathway）;Rapl信号通路（Rapl signaling pathway）3.3.4盐敏感性高血压不同中医证候组间Ghrelin、Obestatin及蛋白芯片研究结果:脾肾阳虚、水饮内停组血清Ghrelin明显低于痰湿壅盛组;痰湿壅盛组血清Obestatin明显高于其他两个证候组;脾肾阳虚、水饮内停组与痰湿壅盛组比较上调的有5个,分别是GH、IGF-1、NT-4、VEGF-D、bFGF,下调的3个,分别是AR、Ghrelin、Obestatin;脾肾阳虚、水饮内停组与阴虚阳亢组比较上调的3个,分别是GH、IGF-1、NT-4,下调的3个,分别是AR、HB-EGF、Ghrelin;痰湿壅盛组与阴虚阳亢组比较上调的2个分别是Obestatin、VEGF R2,下调的2个分别是HB-EGF、bFGF。3.3.5盐敏感性高血压不同中医证候生物信息学分析结果:脾肾阳虚、水饮内停证与阴虚阳亢证比较差异蛋白主要体现在GO生物过程中的生长激素受体信号通路（growth hormone receptor signaling pathway）;脾肾阳虚、水饮内停证与痰湿壅盛证比较差异蛋白主要体现在GO生物过程中的上皮细胞增殖通路 epithelial cell proliferation 以及 KEGG 富集出的 PI3K-Akt;痰湿壅盛证与阴虚阳亢证比较差异蛋白主要体现在GO生物过程中脂质磷酸化生长因子活性通路。4结论:4.1盐敏感性高血压临床常见中医证候为:脾肾阳虚、水饮内停证;阴虚阳亢证;痰湿壅盛证。4.2盐敏感性高血压“Ghrelin-生长激素信号系统”差异表达蛋白谱:IGFBP-3、EG-VEGF、GDNF、IGFBP-2、GH、NT-4、PDGF-AA、PIGF、SCFR、VEGF R2、VEGF R3、VEGF-D、MCSF R 上调,AR、HGF、Ghrelin 下调。4.3盐敏感性高血压与PTP、MAPK及PI3K-Akt信号通路关系密切。4.4盐敏感性高血压不同中医证候“Ghrelin-生长激素信号系统”差异表达蛋白谱:脾肾阳虚、水饮内停证表达谱GH、IGF-1、NT-4、VEGF-D、bFGF上调,AR、Ghrelin、Obestatin、HB-EGF 下调;痰湿壅盛证表达谱 Obestatin、VEGF R2、AR、Ghrelin 上调,HB-EGF、bFGF、GH、IGF-1、NT-4、VEGF-D 下调;阴虚阳亢证表达谱 AR、HB-EGF、Ghrelin、HB-EGF、bFGF 上调,GH、IGF-1、NT-4、Obestatin、VEGF R2 下调。4.5盐敏感性高血压脾肾阳虚、水饮内停证主要与Growth hormone receptor signaling pathway、Epithelial cell proliferation、PI3K-Akt 信号通路相关。痰湿壅盛证主要与 lipid phosphorylation growth factor activity 信号通路相关。阴虚阳亢证主要与 Growth hormone receptor signaling pathway、Growth factor signaling pathway 信号通路相关。
彭佳楠[6]（2017）在《枸杞多糖对UUO模型大鼠氧化应激反应和肾间质纤维化的影响及保护机制》文中认为目的:观察不同剂量枸杞多糖（LBP）对单侧输尿管梗阻（UUO）模型大鼠氧化应激及肾间质纤维化的影响,探讨其对肾脏纤维化的保护机制。方法:将144只SPF级健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、LBP低剂量组、LBP中剂量组、LBP高剂量组和贝那普利组。除假手术组外,UUO模型组和LBP低、中、高剂量组及贝那普利组均行采用经典UUO手术进行造模,术后1天开始,连续灌胃给药3周,其中低、中、高剂量LBP组分别按照LBP 400mg·（kg·d）-1、600mg·（kg·d）-1、800mg·（kg·d）-1灌胃给药;贝那普利治疗组给药1.05mg·（kg·d）-1,假手术组和UUO模型组予以生理盐水等量灌胃。在术后第3、7、14、21天每组各处死6只大鼠,采集血标本检测血清肌酐（Scr）;计算肾脏脏器指数;取梗阻侧（左）肾组织行HE染色和Masson三色染色,观察光镜下的病理变化;ELISA法和比色法检测血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）及转化生长因子β-1（TGF-β1）的水平。结果:（1）与假手术组比较,造模组各时间点Scr及肾脏脏器指数均有不同程度的升高（P<0.05）,提示造模成功。（2）HE染色和Masson三色染色示,假手术组左肾组织结构正常;UUO模型组左肾组织随时间的延长肾小管的病变逐渐加重,间质内炎性细胞浸润由少到多,造模21天时可见灶状纤维化;（3）与UUO模型组比较,LBP低、中、高剂量组及贝那普利组的肾脏脏器指数均有不同程度的下降。造模后7、14、21天时LBP低、中、高剂量组血清MDA水平均低于UUO模型组（P<0.05）;各时间点SOD、GSH-PX含量均高于UUO模型组（P<0.05）,且以LBP中剂量组的效果最明显。（4）LBP低、中、高剂量组及贝那普利组的血清TGF-β1水平明显低于UUO模型组（P<0.05）,以LBP中剂量组和贝那普利组的效果最明显。（5）与UUO模型组相比较,LBP低、中、高剂量组及贝那普利组肾间质中炎性浸润及肾小管损伤较轻,间质纤维化程度不重。结论:（1）枸杞多糖能够减少UUO模型大鼠血清中MDA等氧化应激产物的释放、增加SOD、GSH等抗氧化因子的生成。（2）枸杞多糖能够减轻UUO模型大鼠肾小管间质的病理改变,减慢肾间质纤维化的程度。（3）枸杞多糖能够降低UUO模型大鼠血清中TGF-β1的水平,可能由此抑制肾间质纤维化,延缓CKD的进展。
秦曼[7]（2015）在《芪黄保肾颗粒对肾衰竭幼鼠TGF-β1/ROS/MAPK信号通路的影响》文中认为目的：1.采用单侧输尿管结扎（UUO）法复制肾功能衰竭幼鼠模型,动态观察芪黄保肾颗粒对UUO幼鼠肾功能、肾脏形态变化及间质纤维化的程度。2.动态观察肾功能衰竭幼鼠TGF-β1、氧化应激产物及MAPK信号通路表达的情况,探讨其与幼鼠肾间质纤维化的关系。3.探讨芪黄保肾颗粒拮抗幼鼠肾间质纤维化的可能作用机制,以期有助于临床。方法：将240只4周龄SD雄性幼鼠随机分为假手术组、模型组、芪黄保肾颗粒低、中、高剂量组（以下简称低、中、高剂量组）,采用单侧输尿管结扎的方法复制幼鼠肾功能衰竭模型,于造模后即开始给药,假手术组、模型组仅给予幼鼠蒸馏水进行灌胃,低、中、高剂量组分别给予幼鼠2g·kg-1·d-1、4g·kg-1·d-1、6g·kg-1·d-1芪黄保肾颗粒进行灌胃,连续灌胃28天,1日给药2次,每日08：00和18：00灌胃。分别于UUO术后第7、14、21、28天各组均处死10只幼鼠,每只幼鼠腹主动脉采血法采2-3m1的血,取上清液后测血清中肌酐、尿素氮的含量,迅速摘下梗阻侧肾脏,观察肾脏的外观,生理盐水清洗干净后,部分肾脏组织浸于10%福尔马林中充分固化,光镜观察病理学改变,免疫组化检测TGF-β1蛋白的表达量,剩余部分置于液氮中,部分肾组织匀浆后比色法检测SOD、MDA,酶联免疫吸附法测GSH、ROS含量,部分提取总蛋白后Western blot法测定各组幼鼠肾组织中p-p38MAPK, pERKl/2、Nrf2、γ-GCS蛋白的表达量。结果：1.与模型组相比,芪黄保肾颗粒各剂量组幼鼠一般状态较好,幼鼠的肾衰竭程度及体征优于模型组。芪黄保肾颗粒各剂量组幼鼠的血肌酐、尿素氮水平在各时间点均低于模型组（P<0.05,P<0.01）。相同时间点,芪黄保肾颗粒中剂量组幼鼠肌酐、尿素氮水平最低。而中剂量组与高剂量组肌酐、尿素氮水平相当,组间比较没有统计学意义（P>0.05）。2.与模型组相比,芪黄保肾颗粒各剂量组幼鼠梗阻侧肾脏肿大、积水及肾小管萎缩程度均较轻,肾间质纤维化面积相对较小。3.在各时间点,芪黄保肾颗粒各剂量组幼鼠肾组织匀浆中的MDA、ROS的水平均低于模型组,SOD、GSH的水平在各时间点均高于模型组,肾组织中Nrf2、 γ-GCS蛋白的表达量均高于模型组（P<0.05,P<0.01）。相同时间点,各治疗组中,中剂量组大鼠MDA、ROS水平最低,中剂量组大鼠SOD、GSH水平最高,中剂量组肾组织中Nrf2、γ-GCS蛋白的表达量最高（P<0.05,P<0.0 1）。4.模型组及各治疗组幼鼠肾组织中的T GF-β1、p-p38MAPK、pERKl/2表达随梗阻时间的延长,逐渐增多。芪黄保肾颗粒各剂量组TGF-β1、 p-p38MAPK、pERKl/2蛋白表达量在各时间点均低于模型组（P<0.05,P<0.01）。相同时间点,芪黄保肾颗粒中剂量组幼鼠肾组织中TGF-β1、 p-p38MAPK、pERKl/2蛋白表达最少（P<0.05,P<0.01）。结论：1.芪黄保肾颗粒能够整体调节肾衰竭幼鼠的生存状态,降低血清中肌酐、尿素氮的含量。2.芪黄保肾颗粒能够减轻肾衰竭幼鼠肾脏病理损害,降低肾小管的损伤,减轻肾间质纤维化。3.芪黄保肾颗粒降低了肾衰竭幼鼠肾组织中TGF-β1蛋白的表达。4.芪黄保肾颗粒上调了肾衰竭幼鼠肾组织中Nrf2、γ-GCS蛋白的表达,提高了GSH、SOD的含量,降低了MDA、ROS的含量。5.芪黄保肾颗粒下调了肾衰竭幼鼠肾组织中磷酸化的p38MAPK及ERKl/2蛋白的表达。6.芪黄保肾颗粒可能通过阻断肾衰竭幼鼠肾组织中TGF-β1/ROS/ MAPK信号通路的传导,从而抑制肾间质的纤维化,延缓肾衰竭进展。
宋鑫鑫[8]（2014）在《黄芪、白花蛇舌草含药血清对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1及FN表达的影响》文中提出目的：观察黄芪，白花蛇舌草含药血清对体外培养的肾小球系膜细胞分泌的TGF-β1和FN表达的影响，探讨黄芪，白花蛇舌草防治肾小球系膜细胞增生，硬化的机制。材料与方法：（1）采用血管紧张素Ⅱ作为刺激因子，诱导体外培养的大鼠肾小球系膜细胞过度分泌细胞外基质，使其细胞外基质发生积聚。将肾小球系膜细胞接种于25cm2培养瓶中，加入含10％FBS的DMEM培养液，放置于37℃、5％CO2孵箱中进行培养。约2-3天换一次液，待细胞达到75％融合后，按2×104孔-1的浓度接种于24孔培养板上，每孔设置4个复孔。用含0.5％FBS的DMEM培养液24小时后，更换含10％药理血清DMEM培养液继续培养，待收集细胞待测。（2）SPF级SD大鼠28只，体重180g-220g，雌雄各半。将大鼠按体重随机分为4组，分别为：正常组，黄芪、白花蛇舌草低剂量组，黄芪、白花蛇舌草中剂量组，黄芪、白花蛇舌草高剂量组，每组7只。正常组给予生理盐水1ml/100g（体重）每日一次灌胃，黄芪、白花蛇舌草低、中、高剂量组分别按生药量8g kg-1d、16g kg-1d、32g kg-1d灌胃，连续灌胃6天，末次给药2小时后，腹主动脉取血，血液使用离心机，1500rpm离心5分钟，吸取上清液。经56℃水浴，30min灭活处理，用0.22μm的滤器除菌，置-20℃保存备用。（3）采用实时荧光定量PCR法检测TGF-β1和纤维黏连蛋白的表达。（4）采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组肾小球系膜细胞分泌的FN的表达。结果：1.用RT-PCR法测各组大鼠肾小球系膜细胞分泌的TGF-β1及FN的影响的比较，结果显示，经血管紧张素Ⅱ刺激后，TGF-β1及FN的分泌量显着增加，TGF-β（15.3238±0.5938）以及FN（7.6911±0.7689）与正常组（TGF-β11.0120±0.3288，FN1.0892±0.3475）比较有显着差异（P<0.01）。黄芪、白花蛇舌草低剂量、中剂量、高剂量分泌的TGF-β1（低剂量：0.9045±0.3118，中剂量：3.3949±0.4997，高剂量：2.7856±0.6314）显着降低，与模型组比较有显着差异（P<0.01）。黄芪、白花蛇舌草低剂量、中剂量、高剂量组分泌的FN（低剂量：1.4647±0.0849,中剂量：3.8603±1.0704，高剂量：3.1882±0.2760）显着降低，与模型组比较有显着差异（P<0.01）。用ELISA法检测各组肾小球系膜细胞分泌的FN的影响的比较，正常组721.02±232.35与模型组1722.98±464.46比较，有显着差异P<0.01，黄芪、白花蛇舌草低剂量、中剂量、高剂量组（低剂量组：938.44±454.12，中剂量837.25±284.44，高剂量组：1206.30±511.06）与模型组比较有差异，其中低、中剂量组与模型组比较有显着差异P<0.01，高剂量组与模型组比较有差异，P<0.05。2.用RT-PCR法测各治疗组大鼠肾小球系膜细胞分泌的TGF-β1及FN的影响的比较，TGF-β1：黄芪、白花蛇舌草中、高剂量组与低剂量组之间有显着差异（P<0.01）。中、高剂量组之间比较无差异（P>0.05）。FN:黄芪、白花蛇舌草各剂量组之间比较，中、高剂量组与低剂量组之间有显着性差异（P<0.01）。中、高剂量组之间无差异（P>0.05）。用ELISA法检测各治疗组肾小球系膜细胞分泌的FN的影响的比较，黄芪、白花蛇舌草各剂量组之间比较无差异（P>0.05）。结论：1.黄芪、白花蛇舌草含药血清可以抑制血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞外基质TGF-β1以及纤维黏连蛋白的过度表达，明确了黄芪、白花蛇舌草药物的作用靶点。2．黄芪、白花蛇舌草含药血清低，中，高剂量组对肾小球系膜细胞分泌的TGF-β1和纤维黏连蛋白与模型组比较均有显着差异，但各治疗组之间比较没有差异，说明黄芪、白花蛇舌草对肾小球系膜细胞分泌的TGF-β1和纤维黏连蛋白表达的调节没有量-效关系。
李雪萍[9]（2013）在《MSN对CRF模型大鼠肾纤维化影响的实验研究》文中指出目的：观察MSN对5/6肾切除CRF模型大鼠肾纤维化的影响,探究MSN治疗肾纤维化的作用及其机制,为其临床运用提供实验依据。方法：1.采用5/6肾切除方法建立大鼠CRF模型；通过肾功能检查及24h尿量、24h尿蛋白定量检测评价是否成功建立大鼠CRF模型；病理切片检查评价是否可见肾纤维化病理改变。2.通过肾功能检查及24h尿量、24h尿蛋白定量检测观察MSN对肾脏功能的影响；ELISA检测及病理切片检查观察MSN对肾纤维化的影响。结果：1.5/6肾切除术后第14天,各造模组血清Cys-C、Urea、Crea和24h尿量、24h尿蛋白均显着高于假手术组（P<0.01）。2.各给药组Cys-C、Urea和Crea含量均显着低于模型对照组,24h尿量显着高于模型对照组（P<0.01）,24h尿蛋白与模型对照组相比,无明显差异（P>0.05）。3.各给药组bFGF、CTGF、TNF-α、IL-2和IL-6含量均显着低于模型对照组,IL-1含量显着高于模型对照组（P<0.01）。结论：1.MSN可通过降低血清Cys-C、Urea、Crea和24h尿量、24h尿蛋白改善肾脏功能。2.MSN可通过抑制炎症细胞因子IL-2、IL-6和促纤维化相关因子bFGF、CTGF和TNF-α的分泌,增加炎症细胞因子IL-1的分泌,从而降低炎症反应,抑制系膜和基质的增生,改善肾小管病变,进而缓解肾纤维化。
孙东云[10]（2013）在《化瘀涤痰通路中药调控肾上腺髓质素抑制肾小管上皮细胞表型转化的研究》文中认为慢性肾衰竭在我国近年来的发病率有显着增高的趋势，是严重影响人类健康的疾病之一。目前已有大量的临床及实验结果表明肾间质纤维化在慢性肾脏疾病进展中具有重要作用，故有效地抑制肾间质纤维化可减缓肾脏疾病的进展。肾间质纤维化是多种慢性肾脏疾病进展至慢性肾衰竭的共同病理改变，由多种因素诱导而成，细胞增殖及表型转化均参与这一过程并发挥着重要的作用。肾小管上皮细胞表型转化（tubularepithelial-myofibroblast transdifferentiation，TEMT）的概念由Strutz于1994年提出，并已被证实为肾间质纤维化的核心病理改变，其标志物为α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）。TEMT的发生机制较为复杂，与多种因素相关，单一途径阻断难以获得理想效果，故寻找具有多种生理效应、多途径抑制TEMT的药物对减缓其进展有重要作用。肾上腺髓质素（adrenomedullin，ADM）是1993年发现的一种生物活性多肽，已证实该物质分布于体内多个重要脏器及组织中，肾脏是ADM表达及分布较多的器官之一。ADM具有拮抗转化生长因子β1（Transforming growth factor-β1，TGF-β1）、血管紧张素II（AngiotensinⅡ，AngⅡ）、抗氧化、抗炎等多种生理作用，可以拮抗多种脏器纤维化。TEMT进程中，最为重要的发生机制是转化生长因子-β的诱导作用，故推论ADM可通过调控TGF-β、抑制TEMT从而减轻肾脏损伤，其具体作用机制有待进一步探索。ADM尚未用于临床，中药抑制肾间质纤维化的作用是否与其相关？前期实验研究已证实化瘀涤痰通络中药——肾络通能通过抑制TGF-β1拮抗TEMT的进展，是否通过调控ADM而发挥作用尚不明确。本实验研究采用ADM基因部分敲除小鼠（+/-），以单侧输尿管梗阻（UUO）方法复制肾间质纤维化模型，以醛固酮受体阻断剂依普利酮为对照药物，观察肾络通对野生及ADM基因敲除小鼠肾组织中α-SMA、TGF-β1、Ⅲ型胶原（collagen type Ⅲ，Col Ⅲ）及ADM表达的影响，探讨化瘀涤痰通络中药抑制TEMT拮抗肾间质纤维化的作用机制及其与ADM的关系，为临床提供治疗思路和实验依据。第一部分化瘀涤痰通络中药对ADM基因敲除肾间质纤维化小鼠肾功能及肾脏组织形态学的影响方法：野生及ADM基因敲除小鼠各20只均随机分为四组，即野生小鼠分为假手术组（WT-Sham group）、模型组（WT-UUO group）、依普利酮组（WT-UUOE group）及中药组（WT-UUOS group）四组；基因敲除小鼠同样分为假手术组（AMKO-Sham group）、模型组（AMKO-UUOgroup）、依普利酮组（AMKO-UUOE group）及中药组（AMKO-UUOSgroup）四组。除假手术组游离左侧输尿管但不结扎外，其余各组均行左侧输尿管结扎术。中药组给予化瘀涤痰通络中药肾络通27.6g/（kg.d）经口灌服；依普利酮组给予依普利酮混匀于饲料中按100mg/（kg.d）剂量食入。假手术组及模型组经口灌服与中药汤剂等剂量的生理盐水。观察一般情况，给药10天。于实验结束时，称重，断头取血，分离血清，分别测定血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）水平；摘取左侧肾脏并称重，计算各组肾重/体重比值，进行肾脏组织HE、Masson染色，观察组织病理学改变。数据资料以均数±标准差（±s）表示，使用SPSS16.0for windows统计软件进行统计，组间比较采用单因素方差分析。显着性差异水平以0.05和0.01为标准。结果:1实验小鼠肾重/体重比值测定结果野生及基因敲除小鼠的模型组、依普利酮组及中药组显着高于相应的假手术组（P均＜0.01），但各组之间差异无统计学意义（P均>0.05）。（见Table1-1）2小鼠肾组织病理形态学检测结果HE染色显示，野生及基因敲除小鼠中，假手术组未见明显异常。模型组可见肾小管扩张，肾小管上皮细胞水肿，部分坏死、脱落，炎性细胞在肾间质区广泛浸润。Masson染色显示，野生及基因敲除小鼠中，假手术组肾脏结构未见明显异常，小管基底膜完整，肾间质可见少量胶原成分。模型组肾组织间质胶原成分沉积显着增多，并呈条带状或灶状分布，且基因敲除小鼠重于野生小鼠。依普利酮组及中药组间质胶原成分较模型组明显减少，其中基因敲除小鼠较野生小鼠损伤为重。3肾功能检测结果Scr及BUN测定结果显示，野生及基因敲除中各组小鼠的Scr及BUN值虽有差异，但无统计学意义（P均>0.05）。第二部分化瘀涤痰通络中药对ADM基因敲除肾间质纤维化小鼠α-SMA的影响方法：动物分组、模型复制、给药方法同第一部分，共10天。实验结束时留取肾脏，采用RT-PCR、Western-Blot、免疫组化法检测各组小鼠肾脏α-SMAmRNA及蛋白的表达。统计学方法同第一部分。结果：1肾组织α-SMA mRAN检测结果采用RT-PCR测定α-SMA mRNA在肾组织中的表达，结果显示，野生及基因敲除中的假手术组小鼠呈弱表达，模型组表达较相应的假手术组显着增强（P＜0.01；P＜0.01），且基因敲除模型组显着高于野生小鼠模型组（P＜0.05）。依普利酮组及中药组表达下调（P＜0.01；P＜0.01）。2肾组织α-SMA蛋白检测结果Western Blot结果显示，野生及基因敲除小鼠中的假手术组肾组织α-SMA蛋白表达较弱，模型组表达明显增强，显着高于相应的假手术组（P＜0.01；P＜0.01），且基因敲除模型组显着高于野生小鼠模型组（P＜0.05）。依普利酮组及中药组表达明显低于相应的模型组（P＜0.01；P＜0.01），中药组与依普利酮组无明显差异（P均>0.05）。3肾组织α-SMA免疫组化检测光镜下野生及基因敲除小鼠的假手术组仅在血管平滑肌细胞表达，肾小球、肾小管及间质未见表达；模型组中α-SMA表达明显增多，多见于皮髓交界及皮质区的小管间质部分。基因敲除小鼠模型组表达尤其明显。依普利酮组及中药组α-SMA表达较模型组明显减少。但基因敲除小鼠表达较野生小鼠更为明显。第三部分化瘀涤痰通络中药对ADM基因敲除肾间质纤维化小鼠TGF-β1、Col III的影响方法：动物分组、模型复制、给药方法同第一部分，共10天。实验结束时留取肾脏，采用RT-PCR、Western-Blot、免疫组化法检测各组小鼠肾脏TGF-β1、Col Ⅲ mRNA及蛋白的表达，并用天狼猩红染色法测定肾脏胶原组织表达。统计学方法同第一部分。结果：1肾组织TGF-β1、Col Ⅲ mRNA检测1.1TGF-β1mRNA RT-PCR测定结果显示，野生及基因敲除中的假手术组小鼠呈弱表达，模型组显着高于假手术组（P＜0.01；P＜0.01），基因敲除模型组表达更为明显，显着高于野生小鼠模型组（P＜0.05）；依普利酮组及中药组明显低于模型组（P＜0.05；P＜0.05）。1.2Col Ⅲ mRNART-PCR测定结果显示，野生及基因敲除中小鼠的假手术组呈极弱表达，模型组显着高于假手术组（P＜0.01；P＜0.01），基因敲除模型组显着高于野生小鼠模型组（P＜0.01）；依普利酮组及中药组明显低于相应模型组小鼠（P＜0.01; P＜0.01）。野生及基因敲除小鼠之间比较，基因敲除小鼠中药组及依普利酮组表达均明显高于野生型同组小鼠（P＜0.05；P＜0.05）。2肾组织中TGF-β1及Col Ⅲ蛋白检测2.1TGF-β1Western Blot测定野生及基因敲除小鼠假手术组TGF-β1蛋白少量表达，模型组表达显着高于假手术组（P＜0.01；P＜0.01），基因敲除模型组表达显着高于野生小鼠模型组（P＜0.01）。依普利酮组及中药组表达明显低于相应模型组（P＜0.01；P＜0.01）。2.2Col Ⅲ Western Blot测定结果显示，野生及基因敲除小鼠假手术组少量表达，模型组显着高于相应的假手术组（P＜0.01；P＜0.01），基因敲除模型组显着高于野生小鼠模型组（P＜0.01）。野生及基因敲除小鼠依普利酮组及中药组明显低于相应模型组（P＜0.05；P＜0.01）。野生及基因敲除两型之间比较，基因敲除小鼠中药组与依普利酮组均明显高于野生型的同组小鼠（P＜0.05；P＜0.05）。3肾组织TGF-β1及Col Ⅲ免疫组化检测3.1TGF-β1免疫组化检测野生及基因敲除小鼠的假手术组肾脏TGF-β1呈弱表达，可见于肾小球及肾小管上皮细胞；模型组TGF-β1表达明显增强，其中基因敲除小鼠尤其显着；依普利酮组及中药组表达较模型组明显减少，但基因敲除小鼠较野生小鼠表达明显。3.2Col Ⅲ免疫组化检测野生及基因敲除小鼠的假手术组肾脏可见少量表达，可见于肾小球及肾小管间质；模型组Col Ⅲ表达明显增多，以间质最为明显，其中基因敲除小鼠甚于野生小鼠；依普利酮组及中药组表达较相应模型组明显减少，但基因敲除小鼠较野生小鼠表达明显。4肾脏胶原组织天狼猩红染色测定假手术组肾间质可见胶原组织表达于肾小球、肾小管及间质，野生及基因敲除小鼠间无明显差异；模型组表达明显增多，主要见于肾小管间质，皮质及髓质表达均明显增强，ADM基因敲除小鼠表达尤为显着；依普利酮组及中药组表达较相应模型组明显减弱，但两组中ADM基因敲除小鼠较野生小鼠表达明显。第四部分化瘀涤痰通络中药对肾间质纤维化小鼠ADM表达的影响方法：动物分组、模型复制、给药方法同第一部分，共10天。实验结束时留取肾脏，采用RT-PCR、Western-Blot、免疫组化法检测各组小鼠肾脏ADM mRNA及蛋白的表达。统计学方法同第一部分。结果：1肾组织ADM mRNA检测野生及基因敲除小鼠中假手术组均有表达，但基因敲除小鼠的表达明显低于野生小鼠（P＜0.01）。模型组显着低于相应假手术组（P＜0.01；P＜0.01），其中基因敲除模型组明显低于野生小鼠模型组（P＜0.01）。依普利酮组及中药组ADM表达明显高于相应模型组（P均＜0.05）。2肾组织ADM蛋白检测野生小鼠假手术组ADM表达明显，基因敲除型假手术组表达减弱，与野生型有显着差异（P＜0.01）；模型组ADM表达显着低于相应假手术组（P＜0.01；P＜0.01），基因敲除模型组明显低于野生小鼠模型组（P＜0.01）。依普利酮组及中药组ADM表达明显高于相应模型组（P＜0.05；P＜0.05）。3肾组织ADM免疫组化检测野生小鼠假手术组ADM表达较为广泛，在皮质及髓质均有表达，且以髓质表达为明显，基因敲除小鼠假手术组表达较野生小鼠假手术组明显减弱；两模型组ADM表达明显减少，髓质部减少更为明显，且基因敲除小鼠较野生小鼠表达显着减少，在髓质部几无表达；依普利酮及中药组ADM表达较相应模型组增多，其中野生小鼠表达较基因敲除小鼠为多。结论：1结扎单侧输尿管复制肾间质纤维化实验动物模型，肾间质胶原成分显着增多，其中ADM基因敲除UUO小鼠较野生小鼠更为明显。依普利酮及中药可抑制胶原沉积，抑制作用对野生小鼠更为显着。2肾间质纤维化实验小鼠肾脏TEMT标志物α-SMA表达较假手术组明显增多，其中基因敲除小鼠较野生小鼠为甚；化瘀涤痰通络中药及依普利酮可下调α-SMA在mRNA及蛋白水平的表达。3化瘀涤痰通络中药可下调UUO肾间质纤维化模型小鼠肾组织中TGF-β1、Col Ⅲm RNA及蛋白的表达，减少ECM沉积。4肾间质纤维化实验小鼠肾脏ADM表达较假手术组显着降低，化瘀涤痰通络中药可上调其表达，对野生小鼠ADM的上调作用显着强于基因敲除小鼠。5化瘀涤痰通络中药可上调UUO肾间质纤维化模型小鼠的ADM表达，下调TGF-β1水平，抑制TEMT，减轻肾间质纤维化程度。这可能是中医药防治肾间质纤维化的作用靶点之一。
二、癸水清对5/6肾切除大鼠内皮素、血管紧张素Ⅱ的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、癸水清对5/6肾切除大鼠内皮素、血管紧张素Ⅱ的影响（论文提纲范文）
（1）益肾缓衰方调控IS/AhR/NOX4通路改善动脉粥样硬化性肾病的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 动脉粥样硬化性肾病的中西医研究概况 |
| 参考文献 |
| 综述二 硫酸吲哚酚对多系统毒性作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述三 蛋白结合毒素的中西医治疗现状 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 益肾缓衰方对ARD小鼠小管间质纤维化的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验二 益肾缓衰方改善ARD小鼠小管间质纤维化的机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验三 益肾缓衰方对IS刺激下血管内皮损伤的作用和机制 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（2）桃核承气汤抗肾脏纤维化的药效物质基础及作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭的Meta分析 |
| 引言 |
| 1 方法 |
| 1.1 文献检索 |
| 1.2 纳入与排除标准 |
| 1.3 资料提取与评价 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 文献筛选 |
| 2.2 纳入文献的基本特征 |
| 2.3 文献质量评价 |
| 2.4 Meta分析 |
| 3 讨论 |
| 第二章 桃核承气汤抗肾脏纤维化有效物质部位的筛选研究 |
| 引言 |
| 第一节 桃核承气汤醇提物的制备及各部位的分离 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 小结 |
| 第二节 桃核承气汤有效物质部位的筛选 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 桃核承气汤正丁醇有效物质部位的化学成分研究 |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 1.1 试药与试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 供试药品制备 |
| 2.2 色谱条件 |
| 2.3 质谱条件 |
| 3 分析结果 |
| 3.1 桃核承气汤正丁醇萃取物质部位总离子图 |
| 3.2 色谱峰中主要化学成分的鉴定 |
| 4 讨论 |
| 第四章 桃核承气汤正丁醇有效物质部位抗肾脏纤维化的网络药理学研究 |
| 引言 |
| 1 方法 |
| 1.1 活性成分的筛选 |
| 1.2 活性成分作用靶标预测 |
| 1.3 疾病靶标收集 |
| 1.4 网络构建与分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 桃核承气汤正丁醇有效物质部位的活性成分 |
| 2.2 桃核承气汤正丁醇有效物质部位活性成分-治疗靶标网络构建 |
| 2.3 PPI网络构建 |
| 2.4 GO功能富集和KEGG通路富集分析 |
| 2.5 桃核承气汤正丁醇有效物质部位活性成分-靶标-信号通路网络构建 |
| 3 讨论 |
| 第五章 桃核承气汤正丁醇有效物质部位抗肾脏纤维化的作用机制研究 |
| 引言 |
| 第一节 体外实验研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二节 体内实验研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 1 研究结论 |
| 2 创新点 |
| 3 不足和展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 文献综述 |
| 综述1:肾脏纤维化机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述2:中医药抗肾脏纤维化的作用机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录二 26个化合物分子离子峰图 |
| 附录三 攻读博士期间论文发表及参编论着情况 |
| 致谢 |
（3）尿毒清通过上调Klotho水平缓解5/6肾切除大鼠肾功能不全及肾脏纤维化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 慢性肾脏病概述 |
| 1.1.1 CKD的流行病学概况 |
| 1.1.2 肾纤维化的分子机制 |
| 1.2 Klotho在肾脏纤维化中的作用 |
| 1.3 尿毒清治疗CKD的研究现状 |
| 1.3.1 尿毒清治疗CKD的临床疗效 |
| 1.3.2 尿毒清治疗CKD的药理机制 |
| 1.4 本研究的内容、目的和意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.1.1 饲养条件 |
| 2.1.2 动物饲料 |
| 2.2 试剂与仪器 |
| 2.2.1 抗体与试剂 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 2.3 造模与分组、给药方法 |
| 2.3.1 5/6肾切除造模方法 |
| 2.3.2 分组、给药方法与研究方案 |
| 2.4 蛋白免疫印迹实验(Western blot) |
| 2.4.1 相关试剂的配制 |
| 2.4.2 蛋白的提取及浓度检测 |
| 2.4.3 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 2.5 实时荧光定量PCR(Real-time PCR) |
| 2.6 组织染色与免疫组织化学 |
| 2.6.1 HE染色与Masson染色 |
| 2.6.2 免疫组织化学（IHC) |
| 2.7 统计学分析 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 大鼠的一般情况 |
| 3.1.1 各组大鼠存活情况 |
| 3.1.2 一般情况及肾脏外观特征 |
| 3.2 尿毒清对大鼠血清生化指标的影响 |
| 3.3 尿毒清对大鼠肾脏组织形态的影响 |
| 3.4 尿毒清对肾组织Klotho表达的影响 |
| 3.5 尿毒清对肾组织TGF-β1表达的影响 |
| 3.6 尿毒清对EMT相关分子表达的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 CKD动物模型的特征 |
| 4.2 尿毒清对5/6肾切除大鼠肾功能的影响 |
| 4.3 尿毒清治疗CKD的分子机制 |
| 4.3.1 尿毒清对肾组织Klotho表达的影响 |
| 4.3.2 尿毒清对肾组织TGF-β1表达的影响 |
| 4.3.3 尿毒清对EMT相关分子表达的影响 |
| 4.4 结论与展望 |
| 英文缩略词表 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（4）基于“脾主大腹”探讨健脾益气方调控PI3K/Akt/mTOR信号通路防治PD大鼠腹膜纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 腹膜透析相关性腹膜纤维化的中医药研究 |
| 1.1 中医病名 |
| 1.2 中医病因病机 |
| 1.3 中医治法 |
| 1.4 中医药对腹膜纤维化的干预作用 |
| 2 腹膜纤维化现代医学研究 |
| 2.1 腹膜纤维化形成原因及机制 |
| 2.2 腹膜纤维化的防治 |
| 第二部分 基于“脾主大腹”运用健脾益气方调控PI3K/Akt/mTOR信号通路治疗PD大鼠腹膜纤维化的实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验地点 |
| 1.4 实验试剂 |
| 1.5 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 尿毒症大鼠腹膜纤维化模型的建 |
| 2.2 实验动物分组和给药方法 |
| 2.3 取材方法 |
| 2.4 标本制作 |
| 2.5 观察指标 |
| 2.6 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠一般情况介绍 |
| 3.2 尿毒症大鼠腹膜纤维化模型的评估 |
| 3.3 健脾益气方对腹膜纤维化大鼠腹膜组织病理形态的影响…‥ |
| 3.4 α-SMA、E-Cadherin、PI3K、pAKT、PmTOR蛋白在各组大鼠中的表达 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于腹膜透析大鼠腹膜纤维化模型的建立 |
| 4.2 阿托伐他汀的作用机制研究 |
| 4.3 “脾主大腹”的理论依据 |
| 4.4 “脾主大腹”理论与腹膜纤维化相关性探讨 |
| 4.5 健脾益气方调控PI3K/Akt/mTOR信号通路的作用 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（5）盐敏感性高血压患者血清“Ghrelin-生长激素信号系统”蛋白表达与中医证候学相关性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一部分 综述部分 |
| 综述一: 盐敏感性高血压及与“盐”的中医研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二: “Ghrelin-生长激素信号系统”与高血压关系研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分: 临床研究 |
| 实验一: 盐敏感性高血压相关临床特征研究 |
| 1 对象与方法 |
| 2 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二: 盐敏感性高血压中医证候学临床研究 |
| 1 对象与方法 |
| 2 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第三部分: 实验研究盐敏感性高血压“Ghrelin-生长激素信号系统”蛋白表达及与中医证候学关系研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 本研究的不足之处 |
| 附图 |
| 个人简历 |
| 博士期间发表论文 |
| 致谢 |
| 中医药科研项目查新报告书 |
（6）枸杞多糖对UUO模型大鼠氧化应激反应和肾间质纤维化的影响及保护机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 肾纤维化的病理生理机制及治疗策略 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 个人简历 |
（7）芪黄保肾颗粒对肾衰竭幼鼠TGF-β1/ROS/MAPK信号通路的影响（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1. 现代医学对肾间质纤维化研究的概况与进展 |
| 1.1 肾间质纤维化的病因 |
| 1.2 肾间质纤维化的机制 |
| 1.3 肾间质纤维化的治疗进展 |
| 2. 祖国医学对肾间质纤维化研究进展 |
| 2.1 肾间质纤维化中医病因的认识探讨 |
| 2.2 肾间质纤维化中医病机及辨证论治 |
| 2.3 中医药防治肾间质纤维化 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要试剂的配制方法 |
| 1.5 主要实验仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 实验分组及UUO幼鼠模型的制备 |
| 2.2 给药方法 |
| 2.3 实验取材 |
| 2.4 指标的观察检测 |
| 2.5 数据分析与统计处理 |
| 结果 |
| 1. 各组幼鼠的一般情况 |
| 2. 各组幼鼠梗阻侧肾脏的大体外观 |
| 3. 各组幼鼠血清BUN、Scr检测结果 |
| 4. 各组幼鼠肾组织氧化应激指标检测结果 |
| 4.1 MDA、SOD检测结果 |
| 4.2 ROS检测结果 |
| 4.3 GSH检测结果 |
| 5. 各组幼鼠肾脏组织HE染色结果 |
| 6. 各组幼鼠肾脏组织TGF-β1检测结果 |
| 7. 各组幼鼠肾脏组织Nrf2与γ-GCS蛋白检测结果 |
| 8. 各组幼鼠肾脏组织p-p38MAPK与pERK1/2蛋白检测结果 |
| 讨论 |
| 1. 肾衰竭模型的探讨与建立思路 |
| 1.1 常用动物实验模型 |
| 1.2 动物模型的选择理由 |
| 2. 芪黄保肾颗粒的组方分析 |
| 3. 芪黄保肾颗粒延缓肾间质纤维化的作用机制探讨 |
| 3.1 生存状态的评价 |
| 3.2 肾功能的变化 |
| 3.3 肾间质病理形态学的变化 |
| 3.4 肾组织中TGF-β1蛋白的表达 |
| 3.5 肾组织中氧化应激产物的表达 |
| 3.6 肾组织中MAPK蛋白的表达 |
| 3.7 对TGF-β1/ROS/MAPK信号通路的评价 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 |
| 个人简历 |
（8）黄芪、白花蛇舌草含药血清对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1及FN表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）MSN对CRF模型大鼠肾纤维化影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 实验研究 |
| 1 大鼠CRF模型的建立与评价 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 MSN对肾纤维化影响的研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 数据处理 |
| 2.4 实验结果 |
| 讨论 |
| 1 CRF的西医研究概况 |
| 2 CRF的中医研究概况 |
| 3 肾纤维化的西医研究概况 |
| 3.1 发病机制 |
| 3.2 治疗 |
| 4 肾纤维化的中医研究概况 |
| 4.1 病因病机 |
| 4.2 治法方药 |
| 5 模型的建立 |
| 6 阳性药物的选择 |
| 7 MSN治疗CRF肾纤维化机制初探 |
| 7.1 修复结构损伤 |
| 7.2 改善肾脏功能 |
| 7.3 调节纤维化相关因子 |
| 结语 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录1：文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录2：在读期间发表的学术论文、专着及科研成果 |
| 附图 |
（10）化瘀涤痰通路中药调控肾上腺髓质素抑制肾小管上皮细胞表型转化的研究（论文提纲范文）
| 目录 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 化瘀涤痰通络中药对 ADM 基因敲除肾间质纤维化小鼠肾功能及肾脏组织形态学的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 化瘀涤痰通络中药对 ADM 基因敲除肾间质纤维化小鼠α-SMA表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 化瘀涤痰通络中药对 ADM 基因敲除肾间质纤维化小鼠 TGF-β1及 Col Ⅲ表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 化瘀涤痰通络中药对肾间质纤维化小鼠 ADM 表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述一 肾上腺髓质素与肾脏疾病 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药防治肾间质纤维化的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、癸水清对5/6肾切除大鼠内皮素、血管紧张素Ⅱ的影响（论文参考文献）
- [1]益肾缓衰方调控IS/AhR/NOX4通路改善动脉粥样硬化性肾病的机制研究[D]. 郭传. 中国中医科学院, 2020(01)
- [2]桃核承气汤抗肾脏纤维化的药效物质基础及作用机制研究[D]. 周珊珊. 湖北中医药大学, 2020(08)
- [3]尿毒清通过上调Klotho水平缓解5/6肾切除大鼠肾功能不全及肾脏纤维化[D]. 喻梦. 厦门大学, 2019(09)
- [4]基于“脾主大腹”探讨健脾益气方调控PI3K/Akt/mTOR信号通路防治PD大鼠腹膜纤维化的机制研究[D]. 杜少鹏. 广西中医药大学, 2018(01)
- [5]盐敏感性高血压患者血清“Ghrelin-生长激素信号系统”蛋白表达与中医证候学相关性研究[D]. 褚瑜光. 中国中医科学院, 2017(01)
- [6]枸杞多糖对UUO模型大鼠氧化应激反应和肾间质纤维化的影响及保护机制[D]. 彭佳楠. 宁夏医科大学, 2017(02)
- [7]芪黄保肾颗粒对肾衰竭幼鼠TGF-β1/ROS/MAPK信号通路的影响[D]. 秦曼. 黑龙江中医药大学, 2015(11)
- [8]黄芪、白花蛇舌草含药血清对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1及FN表达的影响[D]. 宋鑫鑫. 辽宁中医药大学, 2014(06)
- [9]MSN对CRF模型大鼠肾纤维化影响的实验研究[D]. 李雪萍. 成都中医药大学, 2013(07)
- [10]化瘀涤痰通路中药调控肾上腺髓质素抑制肾小管上皮细胞表型转化的研究[D]. 孙东云. 河北医科大学, 2013(10)