一、血管内皮生长因子在肿瘤中的作用（论文文献综述）
唐晟杰[1]（2021）在《VEGFR-3、MCM2的表达及D2-40标记的MLVD与食管鳞癌预后相关性分析》文中认为目的:检测血管内皮生长因子受体-3（VEGFR-3）及微小染色体维持蛋白2（MCM2）在食管鳞癌和正常食管组织中的表达,研究食管癌和正常食管组织淋巴管内皮细胞标记分子单克隆抗体（D2-40）标记的微淋巴管密度（MLVD）,并探讨三者与食管鳞癌临床病理特征及预后的关系,为临床预测食管鳞癌淋巴转移提供有意义的实验依据。方法:收集遂宁市中心医院2015年50例具有完整临床资料的手术食管鳞癌组织及20例正常食管组织标本,应用免疫组织化学染色技术检测VEGFR-3与MCM2在蛋白水平的表达,同时计算D2-40标记的微淋巴管密度（MLVD）,并结合患者临床资料,运用x2检验、Fisher确切概率法探究三者与临床病理特征相关性,进一步通过Kaplan-Meier法及R语言survival包分析三者与食管鳞癌患者预后相关性,并绘制生存曲线,最后应用Spearman相关分析及log-rank test组间比较探讨了V EGFR-3及MCM2表达与D2-40标记的MLVD的关系。结果:1.VEGFR-3阳性表达率为58%,显着高于癌旁正常组织,其表达与淋巴结转移有关,而与患者年龄、性别、肿瘤部位、临床分期、分化程度、吸烟史、T分期无关;29例VEGFR-3高表达的食管鳞癌患者平均生存时间为26.75个月,相较于低表达组（39.75个月）具有明显统计学意义（P<0.01）,且两组3年、5年的生存率对比差异有统计学意义（P<0.05）。在VEGFR-3高表达组中,D2-40标记的MLVD阳性表达率为93.1%,高于低表达组52.4%,差异有明显统计学意义（P<0.01）,VEGFR-3表达和D2-40标记的MLVD之间存在正相关关系。2.MCM2阳性表达率为74%,显着高于癌旁正常组织,其表达与临床分期、淋巴结转移、N分期有关,与患者年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、吸烟史无关;37例MCM2高表达组食管鳞癌患者平均生存时间为28.05个月,相较于低表达组（44.00个月）具有统计学意义（P<0.05）,且两组3年、5年生存率比较差异具有统计学意义（P<0.05）。MCM2高表达组中,MLVD阳性表达率为78.4%,高于低表达组61.5%,差异无统计学意义（P>0.05）,并证实MCM2和MLVD值之间不存在相关关系。3.D2-40标记的MLVD阳性率为76.0%,显着高于癌旁正常组织。其表达与淋巴结转移有关,而与患者年龄、性别、肿瘤部位、临床分期、分化程度、吸烟史、T分期无关。38例MLVD阳性的食管鳞癌患者平均生存时间为28.84个月,相较于阴性组（42.83个月）具有统计学意义（P<0.05）,且两组3年、5年生存率比较差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:本研究发现食管鳞癌中VEGFR-3、MCM2及D2-40标记的MLVD均较癌旁正常食管组织明显上调,且与肿瘤淋巴结转移密切相关,与生存期呈负相关,并证实了VEGFR-3和D2-40标记的MLVD存在正相关关系,提示三者在食管鳞癌发生发展及预后中起重要作用,但本研究仍存在一些潜在的局限性,研究对象数量的限制需要多中心大样本分析证实结果,尽管有上述不足,但本研究为食管鳞癌的早期诊断、进展监测、预后评估以及寻找新的治疗靶点提供新思路。
令狐熙涛[2]（2021）在《菊苣酸作用BM-EPCs抑制血管生成的体外实验研究》文中认为目的:探索菊苣酸在低氧环境中对人BM-EPCs表达HIF-1α和分泌VEGF的影响及血管生成的作用和机制,为菊苣酸抑制肿瘤新生血管形成提供前期体外实验依据。方法:（1）通过密度梯度离心法分离人BM-EPCs并传代扩增。（2）用不同浓度Co Cl2溶液进行低氧诱导,通过CCK-8法检测BM-EPCs的细胞活力,然后通过酶联免疫吸附实验及Western blot检测VEGF的分泌和HIF-1α的表达,观察在低氧环境中BM-EPCs的细胞活力及血管内皮生长因子分泌情况。（3）在不同浓度菊苣酸溶液作用下,通过CCK-8法检测菊苣酸溶液对BM-EPCs活力的影响,然后通过ELISA实验检测菊苣酸溶液对BM-EPCs分泌VEGF的影响,最后分别采用血管生成实验和黏附实验检测菊苣酸溶液对BM-EPCs血管生成能力与黏附能力的影响。（4）在低氧条件下用菊苣酸溶液处理BM-EPCs,然后通过Western blot分析菊苣酸溶液对血管生成相关信号通路分子HIF-1α、AHR及AKT/e NOS等表达的影响。结果:（1）ELISA结果提示低氧可促进BM-EPCs分泌VEGF,且分泌量随Co Cl2溶液浓度增加而增加,Co Cl2溶液浓度在100、150、200μM时差异较对照组具有统计学意义（P<0.05）。Western blot结果显示在Co Cl2溶液作用下HIF-1α表达较对照组明显增高,在150μM时HIF-1α表达量最高。（2）CCK-8结果显示BM-EPCs的细胞活力随菊苣酸溶液浓度增加而逐渐下降。2.5、5μM的菊苣酸溶液对细胞活力影响较小,较对照组无统计学意义（P>0.05）;10、20与40μM的菊苣酸溶液可显着抑制细胞的活力,较对照组有统计学意义（P<0.05）,以40μM菊苣酸溶液抑制作用最显着（P<0.01）。（3）血管生成实验显示在低氧环境中,BM-EPCs的血管生成能力明显增强,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）;加入5、10μM菊苣酸溶液后,BM-EPCs的血管生成能力被抑制,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。细胞黏附实验显示在低氧环境中,BM-EPCs的黏附能力明显增强,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）;5、10μM菊苣酸溶液能抑制低氧条件下BM-EPCs的黏附能力,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。（4）ELISA结果提示低氧可促进BM-EPCs分泌VEGF。5、10μM菊苣酸溶液可抑制低氧环境中BM-EPCs分泌VEGF,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。（5）Western blot结果表明菊苣酸溶液可抑制HIF-1α的表达,较对照组和低氧组明显下调;同时激活AHR的表达,较对照组和低氧组明显上调。Western blot结果还显示AKT/e NOS总表达量较对照组和低氧组未见明显变化,但AKT/e NOS磷酸化的相对表达量较对照组和低氧组明显下调,且下调作用随菊苣酸溶液浓度增加而增强。结论:（1）菊苣酸溶液能抑制低氧环境中BM-EPCs表达HIF-1α和分泌VEGF。（2）菊苣酸溶液能抑制低氧环境中BM-EPCs的细胞活力、黏附能力和血管生成能力。（3）菊苣酸溶液可抑制低氧环境中BM-EPCs的AKT/e NOS磷酸化表达水平。
郭敏[3]（2021）在《MYH9通过诱导血管生成和上皮间质转化促进食管鳞癌转移的研究》文中研究指明目的:本研究旨在探讨非肌肉肌球蛋白重链9（Non-muscle myosin heavy chain 9,MYH9）基因在食管鳞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中的功能并寻找潜在的作用机制。方法:对课题组前期进行的104对ESCC全基因组及全外显子组测序结果进行分析,找到与ESCC密切相关的基因MYH9;利用GEPIA 2数据库分析MYH9在ESCC中的表达情况;通过TCGA数据库分析MYH9在多种肿瘤中的变异情况。利用免疫组化技术分析MYH9在57对食管鳞癌及其配对癌旁组织中的表达情况,并进行临床相关性分析;Western blot和q PCR用于检测不同ESCC细胞系中MYH9的内源性表达以及两条MYH9特异性的si RNA和一条非特异性序列对MYH9基因的干扰效率;利用MTT法和transwell法检测敲低MYH9对ESCC细胞功能的影响;使用PCR-array检测敲低MYH9前后差异表达的基因及其富集的通路;体外血管生成实验检测敲低MYH9对ESCC血管生成能力的影响;利用q PCR对PCR-array结果中相关基因的表达进行验证,并通过TCGA数据库检测它们与MYH9的表达相关性;使用GSCA分析下游基因的通路激活百分比。结果:1.MYH9是在ESCC中通过组学测序技术筛选到的突变基因,突变频率为2.88%（3/104）;GEPIA 2数据库中,MYH9在食管癌中的表达显着高于正常组织（p<0.05）,且在不同分期中随着肿瘤的不断发展,该基因的表达逐渐升高（p<0.001）。同时MYH9在多种肿瘤中常发生突变,错义突变是其主要突变类型。另外,我们还发现在TCGA数据库中MYH9的高表达与宫颈鳞癌和头颈鳞癌病人的生存较差相关（p<0.05）。2.MYH9在ESCC中显着高表达于正常组织（p<0.001）;MYH9的表达水平与淋巴结转移相关（p=0.047）,而与年龄、组织学分级和临床分期无关。3.选择MYH9内源性高表达的KYSE140和KYSE180进行干扰,生长曲线显示MYH9对细胞的增殖能力没有明显影响,transwell结果显示敲低MYH9会显着抑制ESCC的迁移和侵袭能力。4.利用PCR-array对敲低MYH9前后的ESCC细胞进行下游基因预测,以表达变化倍数超过2.5倍为筛选标准,共筛选到15个差异表达的基因,其中包括3个上调基因:ATP5A1、CASP9和UQCRFS1;12个下调基因:FLT1、KDR、DSP、CFLAR、KRT14、LDHA、SNAI2、TEK、VEGFC、XIAP、ARNT和CDH2,而这些基因主要分布在与血管生成（angiogenesis）和上皮间充质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关的通路上。5.敲低MYH9后KYSE140和KYSE180血管生成能力受到明显受到抑制;血管生成相关的标志物FLT1、KDR、TEK和VEGFC表达均降低,与间充质表型相关的标志物SNAI2、KRT14和CDH2表达也均降低（p<0.05）。在TCGA数据库中对549例肺鳞癌、307例宫颈鳞癌和565例头颈鳞癌进行分析,发现MYH9与血管生成相关的标志物FLT1、KDR、TEK和VEGFC表达呈正相关;同样,与EMT相关的标志物SNAI2、KRT14和CDH2表达也呈正相关（p<0.001）。GSCA在线分析软件对以上下游基因分析后,发现EMT通路激活是MYH9基因促进癌症发生发展的主要通路。结论:1.MYH9在多种肿瘤组织中易发生突变,在ESCC中MYH9高表达与淋巴结转移密切相关。2.MYH9可能通过诱导血管生成和EMT相关通路促进ESCC的迁移和侵袭。
覃小珊[4]（2021）在《苦参素对HepG2细胞条件培养基诱导的人脐静脉内皮细胞血管生成作用的研究》文中研究说明目的:探讨苦参素对人肝癌Hep G2细胞条件培养基诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）血管生成的作用及其相关分子机制。方法:（1）采用Hep G2细胞条件培养基诱导HUVEC具有肿瘤内皮细胞的特性（TECs）。q PCR检测TEM1、TEM8的表达以明确TECs身份,应用倒置显微镜观察HUVEC在诱导前后的细胞形态。（2）采用ELISA法检测不同细胞培养基中VEGF的含量,并采用q PCR及细胞免疫荧光技术检测诱导前后的HUVEC中VEGFR2、Ets-1的表达。探讨肿瘤条件培养基促使正常ECs向TECs转变的分子机制。（3）采用CCK-8法、细胞划痕实验、体外血管形成实验分别检测浓度分别为0.375mg/m L、0.75mg/m L、1.5mg/m L、3mg/m L、6mg/m L苦参素在不同时间点对TECs增殖、迁移及成管能力的影响。（4）采用q PCR及细胞免疫荧光技术检测苦参素干预TECs前后VEGFR2、Ets-1的表达差异,探讨苦参素抑制TECs血管生成作用可能的分子机制。结果:（1）q PCR结果显示,与阴性对照组相比,经Hep G2细胞条件培养基诱导的HUVEC中TEM1、TEM8、Ets-1、VEGFR2的m RNA表达升高（P<0.05）,说明构建TECs成功。（2）ELISA结果显示,与内皮细胞培养基（endothelial cell medium,ECM）相比,Hep G2细胞条件培养基、混合培养基（含50%Hep G2细胞条件培养基的ECM）中VEGF含量均升高（P<0.001）。（3）细胞免疫荧光技术检测结果显示,与HUVEC相比,TECs中Ets-1、VEGFR2的平均荧光强度增大（P<0.05）。（4）CCK-8法结果显示,苦参素对TECs增殖的抑制作用随浓度增加而增大（P<0.001）;0.375mg/m L、0.75mg/m L、1.5mg/m L、3mg/m L苦参素组对TECs增殖的抑制作用随时间延长而减小,其中3mg/m L苦参素组最明显,差异具有统计学意义（P<0.05）,6 mg/m L苦参素组对TECs增殖的抑制作用随时间延长而增大（P<0.05）,选择0.375 mg/m L、0.75 mg/m L、1.5 mg/m L、3 mg/m L苦参素作为后续实验干预条件,其中3mg/m L浓度组作为后续基因水平及蛋白水平研究的时间效应实验组。细胞划痕实验结果显示,与对照组相比,0.375 mg/m L苦参素组划痕愈合率差异无统计学意义（P>0.05）,其余苦参素组划痕愈合速度随浓度增加而减慢（P<0.05）;苦参素对划痕愈合率的影响随时间延长而越明显（P<0.05）。体外血管形成实验结果显示,细胞在种板3 h后逐渐出现管腔样结构,各组差异无统计学意义（P>0.05）,与对照组相比,0.375 mg/m L苦参素组管形成数量差异无统计学意义（P>0.05）,其余苦参素组管形成数量随浓度增加而减少（P<0.05）;管形成数量随着苦参素干预时间的延长而减少（P<0.05）。（5）q PCR结果显示,与对照组相比,除0.375 mg/m L苦参素组外,不同浓度苦参素作用的细胞中Ets-1、VEGFR2 m RNA表达随苦参素浓度增大而降低（P<0.05）;与对照组相比,3 mg/m L苦参素组细胞中Ets-1、VEGFR2 m RNA表达随作用时间延长而增加（P<0.05）。（6）细胞免疫荧光检测显示,与对照组相比,除0.375 mg/m L苦参素组外,不同浓度苦参素作用的细胞中Ets-1蛋白表达随苦参素浓度增大而降低（P<0.05）;与对照组相比,除0.375 mg/m L、0.75 mg/m L苦参素组外,不同浓度苦参素作用的细胞中VEGFR2蛋白表达随苦参素浓度增大而降低（P<0.05）;与对照组相比,3mg/m L苦参素中Ets-1、VEGFR2蛋白表达随时间延长而增加（P<0.05）。结论:（1）Hep G2细胞条件培养基可以模拟肿瘤微环境诱导正常内皮细胞具备肿瘤内皮细胞的特性,为基于肿瘤内皮细胞的抗肝癌血管生成研究提供了一个细胞模型。（2）苦参素能够抑制Hep G2细胞条件培养基诱导的HUVEC血管生成作用,其机制可能是通过抑制Ets-1的表达进而抑制VEGF/VEGFR2信号转导通路。
饶雪峰[5]（2021）在《miR-27a-3p靶向调控GATA6在胰腺导管腺癌侵袭转移中作用机制的体外研究》文中指出研究背景:胰腺癌具有高度致死性,5年生存率很低,它的特点是容易早期转移,快速浸润,并且对标准治疗容易产生耐药性。胰腺癌以胰腺导管腺癌为主,胰腺导管腺癌占90%以上。根治性手术切除是胰腺癌治疗成功主要手段,但是能被早期诊断出来的胰腺导管腺癌只有15-20%。大部分胰腺癌病人错过手术时机,被诊断出来时已经到了晚期或出现远处转移性。近年来,虽然对胰腺癌的治疗进行了很大的改进（包括化疗、放疗和分子靶向治疗等）,但是胰腺癌病人的5年存活率仍低于7%。过去的几十年里,尽管已阐明了与肿瘤发生有关的一些风险因素,在胰腺癌发展的分子机制上进展甚微。因此,明确提出参与胰腺癌进展的新型生物标志物对于提供早期诊断和开展有效治疗是必要的。微小RNA（miRNAs,miRs）是一类小分子无编码功能的RNA,通过与信使RNA（m RNA）的3′-非翻译区（UTR）直接作用,从而对基因的表达产生抑制作用。在过去的十年中研究显示miRNA在癌变过程中失调,它们与肿瘤的发生、转移和复发密切相关。miRNA异常表达与胰腺癌有密切的关系。例如,miR-10a-5p通过调节转录因子AP-2γ（AP2C）促进胰腺癌吉西他滨耐药。miR-148a通过靶向调控WNT10B从而抑制胰腺导管腺癌细胞从上皮向间质转化,以及抑制胰腺导管腺癌细胞侵袭。miR-337瞄准了Homeobox B7（HOXB7）抑制胰腺导管腺癌细胞的增殖和侵袭。此外,miR-181b-5p、ETS原癌基因1（ETS1）和MET原癌基因（c-Met）信号通路的激活导致了胰腺癌病人很差的预后。miR-27a-3p是成熟miR-27a的亚型,位于人类19p13染色体上,并且发现其经常异常表达,并有助于各种类型的癌症进展。Wang等通过使用来自三个独立队列的Hi Seq 2000测序（健康控制、良性胰腺疾病和胰腺癌）,确定了可以通过联合检测血清CA199和外周血单核细胞的miR-27a-3p水平来鉴别胰腺良恶性肿瘤。最近,Silvestris等认为miR-27a-3p对胰腺癌产生重要的血管生成作用。然而,miR-27a-3p对胰腺癌产生的生物学作用和潜在机制仍有待阐明。目的:本研究将探讨miR-27a-3p在胰腺导管腺癌组织和细胞系中的表达水平,并研究miR-27a-3p在胰腺导管腺癌细胞的体外侵袭、迁移和血管生成中的生物学作用及机制:miR-27a-3p靶向调控GATA6表达,进一步激活VEGFA/VEGFR2信号通路,促进胰腺导管腺癌的侵袭、迁移和血管生成;为miR-27a-3p在胰腺导管腺癌靶向治疗中提供理论基础。方法:通过qRT-PCR和蛋白质印迹分析胰腺导管腺癌组织和癌细胞系中miR-27a-3p、GATA6、VEGFA和VEGFR2的表达情况;用卡方检验分析胰腺导管腺癌病人临床病理特征与miR-27a-3p表达之间的关系;生物信息学分析和荧光素酶报告验证miR-27a-3p对GATA6的靶向调控机制;通过毛细管生成试验和侵袭试验及划痕试验测定肿瘤细胞血管生成和肿瘤细胞侵袭及迁移能力等。结果:在胰腺导管腺癌组织和癌细胞系中,miR-27a-3p表达明显上调（P<0.05）;高表达的miR-27a-3p与肿瘤大小、血管浸润、淋巴结转移和临床分期具有相关性（P<0.05）;高表达的miR-27a-3p与胰腺导管腺癌患者的不良预后具有相关性（P<0.05）。过表达miR-27a-3p降低了GATA6 3′-UTR-WT载体的相对荧光素酶活性（P<0.05）,但对GATA6 3′-UTR-MUT载体的荧光素酶活性没有影响;并且高表达的miR-27a-3p下调了胰腺导管腺癌细胞中GATA6的表达,上调了VEGFA和VEGFR2的表达（P<0.05）,以及增加了癌细胞体外迁移、侵袭能力和血管生成能力（P<0.05）。抑制miR-27a-3p增强了GATA6 3′-UTR-WT载体的相对荧光素酶活性（P<0.05）,但对GATA6 3′-UTR-MUT载体的荧光素酶活性没有影响;并且抑制miR-27a-3p上调了胰腺导管腺癌细胞中GATA6的表达,下调了VEGFA和VEGFR2的表达（P<0.05）,以及抑制了癌细胞体外迁移、侵袭能力和血管生成能力（P<0.05）;GATA6被确定为miR-27a-3p的功能靶基因;同时,在抑制miR-27a-3p的癌细胞中,沉默GATA6可部分逆转VEGFA和VEGFR2蛋白的表达水平,并部分逆转了抑制miR-27a-3p对胰腺导管腺癌细胞迁移、侵袭能力和血管生成能力的影响（P<0.05）。结论:在胰腺导管腺癌组织和癌细胞系中,miR-27a-3p表达明显上调,miR-27a-3p过表达预示着胰腺导管腺癌患者预后不良。miR-27a-3p靶向下调GATA6表达,进一步激活VEGFA/VEGFR2信号通路,促进胰腺导管腺癌的侵袭、迁移和血管生成;miR-27a-3p/GATA6/VEGFA/VEGFR2信号轴为胰腺导管腺癌侵袭转移的重要作用机制。这些表明了miR-27a-3p可作为临床预后检测指标,也可能是胰腺导管腺癌有希望的治疗靶标。
陈凯[6]（2021）在《miR-876调控POSTN促进肝癌进展和纤维化的机制研究》文中研究表明一、研究背景肝细胞性肝癌（HCC）是世界范围内最常见恶性肿瘤之一,目前在最致命肿瘤中致死率排名第二。在过去的几十年,针对肝癌已经有了众多治疗手段,如精准的肝段切除术,肝移植术,肝动脉栓塞化疗及肝癌射频消融术等,但是肝癌患者的预后仍然不令人满意,据统计,肝癌患者5年总生存率低于20%。肝癌起病隐匿,肿瘤进展快,容易复发和肝内转移都是导致肝癌预后较差的可能原因。因此,探究肝癌进展,转移的分子学机制有利于寻找潜在的肝癌治疗分子靶点,开发可能的早期肝癌诊断标志物对肝癌的系统治疗非常重要。微小RNA（miRNA）是以由一类进化保守的,由约22个核苷酸组成的非编码小RNA,微小RNA可结合在靶基因信使RNA（m RNA）的3?端的非翻译区（UTR区）通过降解信使RNA或抑制信使RNA翻译的方式发挥转录后调控作用。研究显示微小RNA几乎参与了肿瘤细胞发生发展的全部过程,包括细胞的干性,肿瘤发生,细胞的增殖,细胞的凋亡,细胞的迁移和侵袭,细胞的转移等等。也有越来越多的研究显示各种肿瘤中均有不同微小RNA的异常表达,包括肝癌。例如,miR-876被发现在胆管癌（CCA）中表达降低,并能通过抑制BCL-XL的表达诱导细胞的增殖;miR-589被发现在肝细胞性肝癌中表达增高并能通过STAT3信号通路来促进细胞的干性和化疗抵抗。然而,在肝细胞性肝癌中异常表达和对诊断或者预后有指示作用的miRNA仍然缺乏有待进一步研究。骨膜蛋白（POSTN）,也称为成骨细胞特异性因子2,是一大小为93.3k Da的细胞外基质（ECM）蛋白。POSTN能通过和众多其他蛋白如纤维结合蛋白,胶原蛋白及腱生蛋白等互相联系进而对细胞外基质进行改造。POSTN对胶原纤维的发生,细胞粘附,细胞迁移和上皮间质转换等都有重要作用。目前研究发现多种肿瘤中亦有POSTN的异常表达,包括头颈部肿瘤,肺癌,神经纤维瘤,乳腺癌,结直肠肿瘤及肝细胞性肝癌等,对肿瘤细胞的生存,上皮间质转换,血管生成和肿瘤微环境的形成都有重要作用。例如:研究发现胰腺癌细胞能刺激间质细胞分泌POSTN,进而促进肿瘤基质成绩和上皮间质转化进而促进肿瘤进展。然后,在肝细胞性肝癌中POSTN的表达及调控机制的研究尚少,有待进一步研究。在本文中,我们通过对TCGA数据库中异常表达的miRNA进行筛选,鉴定出了一异常表达的miRNA,即miR-876。我们还进一步探求了其细胞功能和对下游靶基因的调节机制。我们还在众多临床肝细胞性肝癌的临床组织标本中监测了miR-876和其靶基因POSTN的表达,分析了他们的表达和肝细胞性肝癌患者的临床病理参数和预后的关系。我们的研究提示miR-876及POSTN在肝细胞性肝癌中异常表达,可能作为一潜在的诊断性分子标志物和治疗靶点。二、研究方法1.分析49对肝癌及对应的癌旁样本的TCGA数据库,分析异常表达的miRNA,筛选出表达差异倍数最高的前20个微小RNA。2.收集了从2006年到2010年在西南医院肝胆科因患原发性肝细胞性肝癌而行原发性肝癌切除术的共计127例患者的组织样本,本研究说包含的所有病人术前均未接收放疗或者化疗。所有患者术后均定期性影像学（即超声或CT）即血液AFP检测。本研究团队及西南医院临床研究中心完成患者的预后随访,随访为结合到我院复查情况,定期（每2-3月）电话随访。3.采用实时定量PCR的方法检测了肝癌组织样本中miR-876和POSTN的表达水平;采用免疫组化（IHC）方法在原发性肝细胞性肝癌组织样本中检测了样本中POSTN及EMT标志物（E钙粘蛋白,N钙粘蛋白,波形蛋白）的表达情况,并在肝癌合并肝硬化样本中检测了POSTN的表达。4.采用Kaplan-Meier曲线分析（单因素）和Cox回归（多因素）方法分析了影响HCC患者预后的危险因素及独立危险因素,并进一步分析了miR-876和POSTN共表达对HCC预后的影响。5.采用了生物信息学及双荧光素酶报告基因实验研究了miR-876可能的调控靶基因,并进一步采用实时定量PCR及Western Blotting（WB）方法进行验证。6.Mi R-876的具体体内生物学行为在裸鼠实验中进行检测,最终成瘤效果以活体成像方式进行检测验证。7.采用WB方法分析了miR-876的表达对EMT标志物的影响,并在人肝星状细胞系LX-2中检测了纤维化蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,胶原蛋白-I的表达。采用transwell小室侵袭实验研究了miR-876对肝癌细胞系的侵袭能力的影响。三、研究结果1.通过对49对肝癌患者的TCGA数据库进行分析,我们筛选出了表达差异倍数排名前20的高表达及低表达miRNA,进一步筛选鉴定出miR-876。2.我们发现miR-876在肝癌细胞系及肝癌组织中低表达。首先,我们发现miR-876在人正常肝细胞系L02中表达高,而在肝癌细胞系SMMC-7721,Hep G2,Huh-7及HCC-LM3中表达较低;接下来我们在50对肝癌及癌旁样本中检测了miR-876的表达,发现miR-876在肝癌组织/癌旁组织的比率62%有降低,16%变化不明显,而仅有22%表达升高。3.miR-876的低表达和肝硬化、癌栓及肝癌TNM分期相关。我们在127例HCC组织样本中检测了miR-876的表达,分析了其表达水平和HCC患者临床病理参数的相关性。发现miR-876的表达和肝硬化（P=0.026）、肝癌癌栓形成（P=0.031）及TNM分期（P=0.021）相关。而和其他病理参数,如患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤数量、乙肝、AFP水平、肝Child分级未发现显着相关性。我们还进一步在肝硬化及癌栓患者中检测了miR-876的表达水平,发现miR-876在肝硬化组织样本中表达较非肝硬化患者显着低（P=0.0294）,而其在有肝癌癌栓患者中表达亦显着低（P=0.0367）。4.miR-876抑制细胞侵袭、EMT及细胞纤维化。我们通过构建了miR-876过表达及干扰细胞株,通过transwell细胞侵袭实验发现过表达miR-876的肝癌细胞侵袭力减弱,而干扰miR-876后侵袭力增强,进一步通过WB实验发现过表达miR-876后N-钙粘蛋白及波形蛋白表达减弱,而干扰miR-876后E-钙粘蛋白表达亦减弱。在人星状细胞系LX-2中干扰miR-876表达后发现α-SMA及胶原蛋白-I表达减弱。5.miR-876靶向POSTN,并抑制其表达。我们通过生物信息学分析发现POSTN的3?UTR存在2个能与miR-876种子区结合的序列,进一步双荧光素酶报告基因实验发现野生型p GL3 POSTN荧光素酶质粒和miR-876共转染入293细胞后其萤火虫荧光信号/海肾荧光素酶荧光信号比值显着性降低,进一步WB实验证实当干扰miR-876后HCC细胞POSTN表达升高,而过表达组POSTN显着降低。我们进一步在127例肝癌临床组织标本中同时检测了miR-876和POSTN的表达,发现两者表达呈显着负相关,R值为-0.477,相关线性方程为y=-0.486x+0.394。6.miR-876通过POSTN抑制EMT及细胞纤维化。首先,我们发现过表达POSTN的肝癌细胞侵袭力增强,并促进了EMT标志物及纤维化标志物的表达。其次,我们在过表达POSTN的基础上转染了miR-876,发现共转染miR-876后抵消了侵袭力增加及EMT及纤维化标志物蛋白的表达。7.miR-876在体内动物实验下减弱HCC细胞肿瘤成瘤能力及抑制肿瘤进展。HCC细胞其miR-876过表达的HCC细胞被注入裸鼠肝包膜下,进行动物实验,1月后行活体成像检测,我们发现对照组（无干预的HCC细胞）成瘤数量多,活体成像荧光强度强,而实验组行miR-876过表达后,裸鼠原位肝脏成瘤明显减少,活体检测荧光信号弱,表明在体内实验条件下,miR-876能抑制HCC的成瘤及肿瘤进展。8.POSTN和肝组织EMT及肝硬化相关。我们进一步在127例肝癌组织中检测了POSTN的表达,发现同miR-876类似,POSTN表达和肿瘤数量、肝硬化、肝癌癌栓形成及TNM分期相关,而和其他临床标识物未发现明显相关性,进一步非参数检验验证了肝硬化或肿瘤癌栓组HCC患者的POSTN表达明显增高。IHC实验发现POSTN主要表达与肝癌间质,部分肝癌细胞亦有表达,POSTN高表达的样本N钙粘蛋白及波形蛋白表达增高,而E钙粘蛋白表达降低。而在肝癌伴肝硬化标本中发现POSTN亦有强表达。9.miR-876和POSTN和肝癌患者术后预后相关。进一步KM单因素生存分析发现肿瘤大小（P=0.037）、肝硬化（P=0.041）、肝癌癌栓状态（P=<0.01）、TNM分期（P=0.001）、miR-876低表达（P=0.022）及POSTN高表达（P=0.012）均是影响HCC患者预后的危险因素,多因素回归分析发现肝癌癌栓（风险比=2.530,95%CI区间=1.433-4.468,P=0.001）及POSTN的表达（风险比=1.717,95%CI区间=1.008-2.926,P=0.047）是影响肝癌预后的独立危险因素。进一步共表达分析提示miR-876低表达和POSTN高表达的HCC患者预后较之于miR-876低表达和POSTN高表达更差。四、研究结论综上所述,我们从公开的TCGA数据库中鉴定出了肝癌中一显着性低表达的miRNA,即miR-876。并探索了其对细胞的功能,即能抑制细胞侵袭,EMT和纤维化。而miR-876这些功能是通过调控POSTN的表达实现的。miR-876在体内动物实验下能抑制肝癌的成瘤及进展;我们还在众多肝癌临床标本中从m RNA及蛋白水平证明了miR-876和POSTN的异常表达和肝癌的EMT水平,纤维化水平及进展相关,而miR-876和POSTN的异常表达和HCC的预后相关,而联合miR-876和POSTN检测可能更好预测HCC的预后以及作为潜在的治疗靶点。
尹海涛[7]（2021）在《肾癌微环境M2巨噬细胞检测与MVD相关性研究》文中研究说明目的:检测M2巨噬细胞在肾透明细胞癌组织中表达并比较其与癌旁组织、正常组织的区别,探讨M2巨噬细胞在肾癌发病机制中与微血管密度（MVD）的相关性研究。方法:研究分两部分,第一部分:选取我院泌尿外科2019年6月至2020年9月肾透明细胞癌病例共81例,通过我院伦理委员会同意,收集肾透明癌标本81例,用CD163标记肾癌组织、癌旁组织及正常组织中M2巨噬细胞,用免疫组织化学Envision二步法检测其数量,用CD34标记肾癌肿瘤血管中新生内皮细胞,用Weidener微血管计数方法计算肾癌组织中微血管密度（MVD）;第二部分:依据前面实验结果,应用统计软件SPSS 26.0,数据以均数±标准差（x±s）分析肾癌组织中M2巨噬细胞与MVD的相关性,结合患者性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤病理分级,分析肾癌微环境M2巨噬细胞在肾癌发展机制中的作用。结果:其中男性57例（70.3%）,女性24例（29.6%）;年龄范围38-77岁,平均年龄为49±15.12岁;行肾癌根治性切除术患者49例（60.0%）,行肾部分性切除术患者32例（40.0%）;肿瘤位于左侧肾脏者43例（53.1%）,位于右侧肾脏者38例（46.9%）。2.肾透明细胞癌标本病理特点肿瘤直径在1.5-13cm之间,平均直径为4.0土1.93cm。缺血坏死21例（25.9%）肾癌组织、癌旁组织中均出现M2巨噬细胞（为细胞膜及细胞浆中深黄色颗粒状）,正常组织中有22例未发现M2巨噬细胞,其中M2巨噬细胞在肾癌组织为（59.0±17.8）、癌旁组织为（29.4±16.9）、正常组织（7.1±6.3）,MVD在肿瘤细胞平均57.3±16.3,癌旁组织49.1±19.2,正常组织37.8±16.1,WHO/ISUP（International Society Urological Pathology ISUP）分级中1级1例（1.2%）、Ⅰ-Ⅱ级15例（18.5%）、Ⅱ级26例（32.1%）、Ⅱ-Ⅲ级31例（38.3%）、Ⅲ级7例（8.6%）、IV级1例（1.2%）,统计结果:比较肾癌组织、癌旁组织的双样本t检验中,p<0.05,肾癌组织中（CD163+）M2巨噬细胞与MVD的相关性r=0.718,P<0.01。结论:1、CD163、CD34在肾癌组织、癌旁组织中表达与患者性别、年龄无关;2、肾癌组织中M2巨噬细胞显着多于癌旁组织及癌旁正常组织（P<0.05）;3、肾癌微环境M2巨噬细胞与MVD呈正相关（r=0.718,P<0.01）;4、M2巨噬细胞通过增加MVD加速肾癌的生长和侵袭;5、肾癌微环境M2巨噬细胞通过增加MVD增加肾癌WHO/ISUP分期
魏金婴[8]（2021）在《miR-326调控SIRT1/HIF1α/VEGFA轴改善非小细胞肺癌化疗耐药的分子机制》文中提出背景:肺癌是世界上发病率和死亡率增长最快的肿瘤之一,是导致癌症相关死亡的主要原因,每年全世界有近200万人死于肺癌。其中,非小细胞肺癌占肺癌的80%。随着世界人口老龄化的进展,以及环境的改变,社会及生活心理压力的剧增,肺癌的发病率及死亡率逐年提升,且有年轻化的趋势。目前临床上已有多种可供选择的治疗方案,比如手术治疗,放疗、化疗,包括靶向治疗以及免疫治疗等方法。肺癌在基因层面的研究,已挖掘很多靶点,但是仍有很大空间未被发掘。化疗仍是肺癌治疗的基石。近年的研究表明,miRNAs在肺癌的治疗中显示了潜在的效用,在表观遗传学研究方面发现,miRNAs可能通过调控组蛋白从而影响和参与到肺癌的发生和发展中。SIRT1是一种III类组蛋白去乙酰化酶（HDAC）,是一种可调节许多涉及染色质结构、凋亡、自噬和线粒体转录调控的蛋白质。深度参与基因调控、基因组稳定性维持、凋亡、自噬、增殖、衰老和肿瘤发生,在癌症耐药性的多个方面发挥着关键作用。有研究报道,靶向SIRT1活性或基因表达可能是肺癌治疗的新策略之一。HIF1α（缺氧诱导因子1α）已被认为是一种重要的抗癌药物靶点,HIF1α在肿瘤转移、血管生成、患者预后差以及肿瘤耐药治疗方面有很强的相关性;VEGFA（血管内皮生长因子-A）驱动的肿瘤血管生成的高度冗余和复杂性可能解释了为什么肿瘤通常会对靶向VEGFA信号转导的抗血管生成治疗产生耐药性。VEGFA由体内大多数细胞产生,但在缺氧时上调。研究方法:生物信息学分析:通过挖掘GEO数据库（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）检索获得肺癌microRNA相关表达芯片GSE51853,采用R语言“limma”包,设置|logFC|>1,p value<0.05为阈值,进行差异分析。利用Star Base数据库（http://starbase.sysu.edu.cn/）、RNAInter数据库（http://www.rna-society.org/rnainter/）和miRanda数据库（http://www.microrna.org/microrna/home.do）对micro RNA的靶向调控基因进行预测,三个网站使用不同的算法进行预测,取三个预测结果的交集增加预测结果的可信度。通过miRNA.org数据库预测miRNA靶向基因;通过UCSC（http://genome.ucsc.edu/）和JASPAR（http://jaspar.genereg.net/）两个网站分析得出HIF1α蛋白在VEGFA启动子有可能的结合位点,提出理论假设。细胞学实验:细胞培养:人肺癌细胞系H460和人胚肾细胞系HEK293购自中国科学院（中国上海）的典型培养物保藏委员会细胞库。H460细胞使用RPMI-1640+10%FBS培养基,HEK293在DMEM+10%FBS的培养基中培养,均置于37℃,5%CO2的培养箱中。化学抗性细胞H460-R由亲本细胞系H460开发,通过将化学疗法药物DDP（顺铂）浓度从0.05μg/ml增加至2μg/ml梯度暴露细胞约12个月,以获得化学抵抗性。质粒和si RNAs转染:MiR-326 mimic、MiR-326 inhibitor、过表达SIRT1（eo-SIRT1）、抗HIF1α（HIF1αsi RNA）的小干扰RNA（si RNA）、血管内皮生长因子A（VEGFA）si RNA和阴性对照（NCs）由Gene Chem有限公司（上海,中国）合成。将细胞接种于6孔板中过夜,将2μg质粒与X-treme GENE HP DNA转染试剂（Roche Applied Science,Basel,Switzerland）混合。根据制造商说明,使用Lipofectamine TM RNAi MAX转染试剂（Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA,USA）用上述质粒转染细胞。转染48小时后收集细胞用于后续实验。qRT-PCR实验检测miR-326和SIRT1在非小细胞肺癌细胞系H460及其耐药细胞H460-R中的表达情况;采用双荧光素酶报告基因试验和RIP试验验证和检测miR-326与SIRT1的结合及调控关系,以及SIRT1通过去乙酰化抑制HIF1α降解;ChIP实验及qRT-PCR从多角度验证了SIRT1与HIF1α的调控关系;ChIP实验及双荧光素酶截短实验检测转录因子HIF1α与VEGFA启动子位点的结合情况;MTS法和流式细胞仪分别检测细胞活力和凋亡情况,判断H460-R细胞的耐药改善;Western blot分析细胞中SIRT1、HIF1α、VEGFA、c-PARP1、c-Caspase-3和γ-H2AX的蛋白表达,荧光素酶检测γ-H2AX的阳性表达,MTS及流式细胞术监测耐药细胞的生存及凋亡情况。动物实验:以裸鼠肿瘤形成为指标,BALB/c裸鼠（Nu/Nu,雌性,4-6周,n=8只/组）,转染物皮下注射:NC agomir组,miR-326 agomir组,NC agomir+DDP组,miR-326 agomir+DDP组,所有小鼠在无病原体条件下维持生命活动;一周后,每3d用DDP（3.0mg/kg体重）处理小鼠,肿瘤体积检测持续4周。评价其成瘤能力评估耐药改善。实验结果:1、miR-326在非小细胞肺癌中差异表达;miR-326与SIRT1的3’UTR区结合,负调控SRIT1,改善非小细胞肺癌细胞的化疗耐药;2、miR-326改善细胞耐药,SIRT1促进细胞耐药;3、SIRT1通过去乙酰化作用调节转录因子HIF1α;沉默SIRT1通过抑制其去乙酰化作用来促进HIF1α的蛋白酶体降解;HIF1α降解改善NSCLC化疗耐药。沉默SIRT1的表达促进转录因子HIF1α的降解来改善NSCLC细胞的化疗耐药;4、HIF1α在VEGFA启动子上结合,SIRT1通过HIF1α促进VEGFA的表达;SIRT1促进VEGFA的表达;沉默VEGFA改善NSCLC化疗耐药;SIRT1通过转录因子HIF1α促进VEGFA的表达,调控化疗耐药;5、过表达miR-326在体内改善非小细胞肺癌细胞化学耐药性。结论:化疗仍是NSCLC治疗的基石。本文通过生物信息学预测结合实验证实研究是合理且高效的研究方法。大量查阅文献发现,miRNAs已作为肿瘤发生发展机制中的重要调节因子得到广泛研究,技术方法成熟,并且在表观遗传学方面也得到了大量研究。miR-326在肿瘤化疗耐药方法虽然已有研究,但并未进行机制的研究和探讨;SIRT1、HIF1α、VEGFA均有报道作为参与NSCLC的发生发展以及耐药过程,但他们直接是否有明确联系未见报道;因此本文从这一点入手进行探讨。本文通过生物信息学预测,文献检索,实验验证相结合的方法探讨机制,研究发现一条新的通路miR-326→SIRT1/HIF1α/VEGFA→NSCLC。然而miRNA与基因并不是一对一关系,单一通路研究不是唯一通路;细胞层面的研究较为局限,动物实验相对较少,在未来的研究中可结合临床标本做进一步研究增加可信度。miR-326通过介导SIRT1/HIF1α/VEGFA轴的表达,改善非小细胞肺癌的化疗耐药。这些结果表明miR-326是一个很有前途的肺癌治疗新靶点。
杨会珍[9]（2020）在《LINC00667通过稳定VEGFA促进肺腺癌血管生成机制研究》文中研究指明背景与目的:肺癌是全球男女发病率最高的恶性肿瘤,寻求精准的诊断生物标志物和治疗靶点的识别甚为必要。这些公认的生物标志物包括长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNAs）。LncRNA 序列大于 200bp,常被认为是一类单一的转录本,不具有蛋白质编码能力,但它们可以在DNA-RNA-蛋白质水平上调控分子过程。通过参与表观遗传、转录和转录后机制,在抑癌基因和癌基因表达的调控中起着重要作用。VEGF-A-VEGFR轴在生理和病理血管生成和血管通透性中都是关键的。VEGF-A-VEGFR 轴（VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR-2）中仅一个基因的剪接中断就会导致整个信号轴的改变,从而导致癌症中VEGFR-2信号的增加和血管生成异常。本研究我们首先利用基因芯片技术筛选出差异LncRNAs,经RT-PCR技术验证LINC00667在肺腺癌组织标本中高表达,且沉默LINC00667抑制肺腺癌细胞株增殖、迁移,促进凋亡,提示LINC00667为促癌基因,通过生物信息软件分析,提示LINC00667可能与VEGF-VEGFR通路相关,进一步验证LINC00667如何通过与VEGFA的相互作用调控病理性血管生成。本研究结果将为肺癌抗血管生成机制的基础研究及治疗提供新思路。方法:第一部分LINC00667在肺腺癌组织的表达及临床意义方法1.利用基因芯片技术检测3对肺腺癌及癌旁正常肺组织新鲜冰冻标本中lncRNA的表达,筛选出表达明显差异的LncRNA;2.在40例新鲜冰冻腺癌组织及癌旁正常肺组织中利用Real-time PCR方法检测包含LINC00667在内的4个差异LncRNA表达水平;3.检测肺腺癌细胞系及正常肺上皮细胞系中LINC00667表达;4.将LINC00667表达水平与研究对象临床指标相关性进行分析,卡方检验方法研究分析LINC00667表达是否与肺腺癌疾病发展及预后相关。结果1.基因芯片检测初步在肺腺癌及其配对癌旁组织中筛选出有差异表达的LncRNA共800条,生物信息分析筛选后发现其中有显着差异的20条,10条（50%）在肺腺癌组织标本中明显上调,10条（50%）明显下调,LINCOO667在肺腺癌组织标本中表达水平明显增高。2.在肺腺癌与癌旁正常肺组织中利用RT-PCR方法检测LINC00667结果显示,相对于邻近的正常肺组织,LINC00667在85%（34/40）的肺腺癌样本中明显高表达（P<0.05）,差异有统计学意义。3.相对于人 IMR90 细胞系,LINC00667 在肺腺癌 H1975,H23,H1299 和 SPC-A1细胞系中表达明显增加（P<0.05）,其中在SPC-A1和H1299细胞中的表达丰度均为高,在其余两株细胞中的表达丰度为中。4.LINC00667NSCLC患者的表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期、脉管系统浸润情况相关（P<0.05）,与患者性别、年龄、吸烟史、病变位置无关。第二部分沉默LINC00667抑制肺腺癌细胞增殖、迁移及血管生成方法1.构建沉默LINC00667表达的重组慢病毒载体,对数生长期SPC-A1和H1299细胞分别转染慢病毒表达载体及对照组空质粒载体,RT-PCR检测转染后细胞内LINC00667表达情况。2.利用 Cell counting kit-8（CCK-8）及 EdU analysis 技术,检测沉默 LINC00667对SPC-A1和H1299细胞增殖能力的影响。3.利用Transwell实验检测沉默LINC00667对SPC-A1和H1299细胞迁移能力的影响。4.Tube formation assay血管生成实验检测沉默LINC00667后血管生成情况。结果1.结果显示转染慢病毒表达载体的SPC-A1和H1299细胞系的LINC00667表达量较空质粒对照组明显减少,证实转染率较高,成功获取沉默LINC00667的SPC-A1和H1299细胞株。2.CCK8及EdU analysis实验结果显示在转染慢病毒载体shLINC00667后,细胞增殖能力受到抑制。3.Transwell实验结果显示在转染慢病毒载体shLINC00667后,SPC-A1和H1299穿过基底膜基质的细胞数量明显减少,迁移能力受到抑制。4.沉默LINC00667可以抑制血管生成。第三部分LINC00667通过VEGFA通路促进肺腺癌血管生成方法1.微阵列数据分析（Microarray analysis）与 LINC00667 及 VEGFA 相关的 RNA结合蛋白。2.Real time-qPCR方法检测肺腺癌标本中VEGFA及EIF4A3的表达。3.利用上调VEGFA慢病毒载体（pcDNA3.1/VEGFA）转染SPC-A1和H1299细胞,Tube formation assay血管生成实验检测血管生成情况,采用CCK8、Transwell实验检测上调VEGFA对SPC-A1和H1299细胞增殖、迁移的影响。4.Western-blot 技术检测沉默 LINC00667 对 SPC-A1 和 H1299 细胞中 VEGFA、EIF4A3表达的影响。5.检测沉默EIF4A3对SPC-A1和H1299细胞血管生成、增殖和迁移的影响。结果1.生物信息分析结果显示LINC00667与RNA结合蛋白EIF4A3可以结合。2.肺腺癌组织较癌旁组织中VEGFA、EIF4A3表达升高,沉默LINC00667后,VEGFA表达量明显下降,说明LINC00667与VEGFA有相关性。另外,VEGFA启动子的荧光素酶活性不受影响,LINC00667通过转录后水平影响VEGFA生物活性。3.过表达SPC-A1细胞中VEGFA能促进增殖,迁移,促进血管生成。4.Sh-LINC00667慢病毒载体转染SPC-A1和H1299细胞,VEGFA蛋白表达水平明显下降（P>0.05）,EIF4A3表达水平无影响。沉默肺腺癌细胞SPC-A1和H1299中LINC00667能抑制VEGFA的表达,可使与VEGFA结合的EIF4A3蛋白减少。5.加入EIF4A3抑制剂后,SPC-A1和H1299细胞增殖、迁移及血管生成能力减弱。结论:1.LINC00667和VEGFA在肺腺癌中表达水平较高,LINC00667与肿瘤大小、淋巴结转移情况、TNM分期以及脉管系统浸润情况有相关性。2.LINC00667可促进肺腺癌的增殖、迁移及血管生成。3.LINC00667可能通过与EIF4A3结合调控肺腺癌VEGFA的稳定性,促进血管生成,有望成为肺腺癌新的治疗靶标。
欧阳漫多[10]（2020）在《脂多糖诱导MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的可能机制研究》文中提出目的:近些年来,研究人员发现脂多糖（LPS）对于包括乳腺癌在内的多种癌症的发展与转移具有促进作用,但是其具体机制尚未完全明确。探讨LPS是否可以促进MDA-MB-231细胞的增殖、迁移、侵袭,以及其可能机制。方法:选用MDA-MB-231细胞株常规培养,将实验依照加入的LPS溶液浓度分为5μg/ml组、10μg/ml组,20μg/ml组、40μg/ml及不添加LPS的对照组,分组进行细胞增殖实验、细胞划痕实验及细胞侵袭实验,并使用Elisa试剂盒检测不同浓度组细胞株中VEGF-R2及VEGF-D的表达。结果:在细胞增殖、划痕及侵袭实验中,经LPS刺激的MDA-MB-231细胞株较对照组均体现出明显的增殖、迁移及侵袭的趋势,且这种趋势与LPS浓度呈正相关,其差异具有统计学意义（P<0.05）;且5组实验组中VEGFR2及VEGF-D的表达随着LPS浓度的增高而逐步上升,两两之间比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论:LPS可以促进MDA-MB-231细胞的增殖、迁移、侵袭,且这种促进用与LPS浓度呈正相关。MDA-MB-231细胞中VEGF-R2及VEGF-D的表达水平与LPS浓度呈正相关,提示LPS促MDA-MB-231细胞进展的作用可能与血管和淋巴管新生相关
二、血管内皮生长因子在肿瘤中的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、血管内皮生长因子在肿瘤中的作用（论文提纲范文）
（1）VEGFR-3、MCM2的表达及D2-40标记的MLVD与食管鳞癌预后相关性分析（论文提纲范文）
| 中英缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 MicroRNAs在食管癌发病机制和治疗中的意义 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）菊苣酸作用BM-EPCs抑制血管生成的体外实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 肿瘤新生血管形成机制与治疗的相关研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）MYH9通过诱导血管生成和上皮间质转化促进食管鳞癌转移的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 MYH9 的高表达与淋巴结转移相关 |
| 2.2 敲低MYH9 基因抑制食管鳞癌细胞的迁移和侵袭能力 |
| 2.3 敲低 MYH9 基因抑制食管鳞癌细胞迁移和侵袭的机制研究 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 抗血管生成药物与肿瘤研究 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（4）苦参素对HepG2细胞条件培养基诱导的人脐静脉内皮细胞血管生成作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 人肝癌Hep G2 细胞条件培养基诱导正常内皮细胞具有肿瘤内皮细胞的特性 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 苦参素对Hep G2 细胞条件培养基诱导的人脐静脉内皮细胞血管生成作用的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 不足与展望 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述1 ETS 转录因子家族在消化道肿瘤中的作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述2 肿瘤微环境对肝细胞癌血管生成的影响 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（5）miR-27a-3p靶向调控GATA6在胰腺导管腺癌侵袭转移中作用机制的体外研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 胰腺导管腺癌概述 |
| 1.2 mi R-27a-3p概述 |
| 1.3 GATA6 概述 |
| 第2章 mi R-27a-3p在胰腺导管腺癌中表达 |
| 2.1 摘要 |
| 2.2 前言 |
| 2.3 材料和方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 2.5 结果 |
| 2.6 讨论 |
| 2.7 结论 |
| 第3章 mi R-27a-3p促进胰腺导管腺癌细胞体外侵袭和迁移及血管生成 |
| 3.1 摘要 |
| 3.2 前言 |
| 3.3 材料和方法 |
| 3.4 统计分析 |
| 3.5 结果 |
| 3.6 讨论 |
| 3.7 结论 |
| 第4章 mi R-27a-3p靶向下调GATA6 |
| 4.1 摘要 |
| 4.2 前言 |
| 4.3 材料和方法 |
| 4.4 统计分析 |
| 4.5 结果 |
| 4.6 讨论 |
| 4.7 结论 |
| 第5章 mi R-27a-3p/GATA6/VEGFA/VEGFR2 信号轴在胰腺导管腺癌细胞的侵袭、迁移和血管生成起重要作用 |
| 5.1 摘要 |
| 5.2 前言 |
| 5.3 材料和方法 |
| 5.4 统计学分析 |
| 5.5 结果 |
| 5.6 讨论 |
| 5.7 结论 |
| 第6章 总结与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述一 转录调节因子 GATA6 在肿瘤中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 miR-27a-3p在消化系统肿瘤中的研究进展 |
| 参考文献 |
（6）miR-876调控POSTN促进肝癌进展和纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 HCC中抑癌miR-876从TCGA数据库的筛选鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 miR-876在HCC细胞及组织中低表达 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 miR-876 的异常表达和HCC进展及纤维化相关 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 miR-876 抑制HCC的 EMT及纤维化 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 miR-876 靶向调控POSTN |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 miR-876 通过POSTN抑制HCC的 EMT及纤维化 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.2 结果 |
| 7.3 讨论 |
| 7.4 小结 |
| 第八章 POSTN高表达和HCC组织EMT及肝硬化相关 |
| 8.1 材料与方法 |
| 8.2 结果 |
| 8.3 讨论 |
| 8.4 小结 |
| 第九章 miR-876及POSTN的异常表达和HCC预后相关 |
| 9.1 材料与方法 |
| 9.2 结果 |
| 9.3 讨论 |
| 9.4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 骨膜蛋白(POSTN)的结构功能及其在肿瘤中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（7）肾癌微环境M2巨噬细胞检测与MVD相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略语对照表 |
| 绪论 |
| 第一章:材料与方法 |
| 1.1 临床资料与实验准备 |
| 1.1.1 临床资料和标本 |
| 1.1.2 主要实验仪器 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 阳性结果判定 |
| 1.4 统计学处理 |
| 第二章 结果 |
| 2.1 M2 巨噬细胞表达于肾癌及癌旁组织,正常组织有少量表达 |
| 2.2 M2 巨噬细胞在肾癌组织、癌旁组织及正常组织表达中的差异 |
| 2.3 MVD在肾癌各组织中的表达 |
| 2.4 肾癌组织、癌旁组织中M2 巨噬细胞计数与MVD的相关性 |
| 2.5 巨噬细胞和MVD在侵及肾周脂肪与纤维膜表达差异 |
| 2.6 M2 巨噬细胞在WHO/ISUP高分级组与低分级组中的表达 |
| 第三章 讨论 |
| 3.1 M2 巨噬细胞通过增加MVD促进肾癌组织生长 |
| 3.2 M2 巨噬细胞通过增加MVD促进肾癌侵袭 |
| 3.3 M2 巨噬细胞通过增加MVD提高肾癌WHO/ISUP分级 |
| 第四章:结论 |
| 参考文献 |
| 综述 肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤发展机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）miR-326调控SIRT1/HIF1α/VEGFA轴改善非小细胞肺癌化疗耐药的分子机制（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略对照表 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 肺癌的概述 |
| 1.1.1 肺癌的流行病学和现状 |
| 1.1.2 肺癌的生物学 |
| 1.1.3 化疗仍是肺癌治疗的基石 |
| 1.1.4 肺癌新兴治疗 |
| 1.2 MicroRNAs的概述 |
| 1.2.1 MicroRNA的起源 |
| 1.2.2 MicroRNA的生物学功能 |
| 1.2.3 MicroRNA与肿瘤 |
| 1.2.4 MiRNAs作为诊断标志物 |
| 1.3 MicroRNA-326 的概述 |
| 1.3.1 MicroRNA-326 在肿瘤中的研究 |
| 1.3.2 MicroRNA-326 与生物标志物 |
| 1.3.3 MicroRNA-326 与治疗 |
| 1.4 SIRT1 的概述 |
| 1.4.1 SIRT1的生物学功能 |
| 1.4.2 SIRT1与肺癌 |
| 第2章 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器设备 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 肺癌microRNA芯片差异分析与生信预测 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 质粒和siRNAs转染 |
| 2.2.4 RNA提取和qRT-PCR分析 |
| 2.2.5 Western blot |
| 2.2.6 细胞活力测定 |
| 2.2.7 流式细胞分析 |
| 2.2.8 免疫荧光试验 |
| 2.2.9 荧光素酶报告分析 |
| 2.2.10 RIP |
| 2.2.11 CHIP |
| 2.2.12 裸鼠成瘤 |
| 2.3 统计分析 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 生物信息学预测 |
| 3.1.1 miR-326在非小细胞肺癌中差异表达 |
| 3.1.2 miR-326靶向基因预测 |
| 3.1.3 HIF1α是SIRT1直接靶点 |
| 3.1.4 HIF1α在VEGFA启动子区靶向结合 |
| 3.1.5 提出理论假设 |
| 3.2 miR-326负调控SRIT1,改善NSCLC细胞的化疗耐药 |
| 3.2.1 miR-326、SIRT1在NSCLC及耐药细胞中的表达 |
| 3.2.2 miR-326与SIRT1的3’UTR区结合 |
| 3.2.3 miR-326改善细胞耐药,SIRT1促进细胞耐药 |
| 3.3 沉默SIRT1的表达促进转录因子HIF1α的降解来改善NSCLC细胞的化疗耐药 |
| 3.3.1 SIRT1通过去乙酰化作用调节转录因子HIF1α |
| 3.3.2 沉默SIRT1的表达促进转录因子HIF1α的降解 |
| 3.3.3 HIF1α降解改善NSCLC化疗耐药 |
| 3.4 SIRT1 通过HIF1α促进VEGFA的表达,调控化疗耐药 |
| 3.4.1 HIF1α在VEGFA启动子上结合,SIRT1通过HIF1α促进VEGFA的表达 |
| 3.4.2 SIRT1促进VEGFA的表达 |
| 3.4.3 沉默VEGFA改善NSCLC化疗耐药 |
| 3.5 过表达miR-326在体内改善NSCLC细胞化疗耐药 |
| 3.5.1 裸鼠成瘤实验 |
| 3.5.2 过表达miR-326改善NSCLC化疗耐药 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在校期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（9）LINC00667通过稳定VEGFA促进肺腺癌血管生成机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文索引 |
| 引言 |
| 第一部分 LINC00667在肺腺癌组织的表达及临床意义 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 标本 |
| 2.2 试剂 |
| 2.3 仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 LncRNA基因芯片分析 |
| 3.2 Real-time PCR方法检测肺腺癌组织及细胞系中差异LncRNA表达 |
| 3.3 分析LINC00667与肺腺癌患者临床数据的相关性 |
| 3.1 统计学分析 |
| 4 结果 |
| 4.1 LncRNA基因芯片分析结果 |
| 4.2 LINC0667在肺腺癌组织及细胞中表达水平较高且与临床参数相关 |
| 4.3 LINC00667的表达与临床特征的关系 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 沉默LINC00667抑制肺腺癌细胞增殖、迁移及血管生成 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 细胞株:同第一部分 |
| 2.2 载体及慢病毒辅助包装载体 |
| 2.3 试剂 |
| 2.4 设备 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 慢病毒载体的构建 |
| 3.2 慢病毒感染SPC-A1和H1299细胞 |
| 3.3 RT-qPCR检测沉默LINC00667对SPC-A1和H1299细胞株中LNC00667表达的影响 |
| 3.4 CCK8法检测LINC00667对SPC-A1和H1299细胞增殖能力的影响 |
| 3.5 TRASWELL检测沉默沉默LINC00667对SPC-A1和H1299细胞迁移能力的影响 |
| 3.6 Tube formation assay血管成管实验检测沉默LINC00667后血管生成影响 |
| 3.7 统计学分析 |
| 4 结果 |
| 4.1 构建沉默LINC00667慢病毒载体 |
| 4.2 沉默LINC00667对SPC-A1和H1299细胞中LINC00667表达的影响 |
| 4.3 CCK8法检测shLINC00667对SPC-A1和H1299细胞增殖能力的影响 |
| 4.4 TRASWELL实验检测shLINC00667对SPC-A1和H1299细胞迁移能力的影响 |
| 4.5 Tube formation assay技术检测shLINC00667对SPC-A1和H1299细胞血管生成的影响 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 LINC00667通过EIF4A3调控VEGFA通路促进肺腺癌血管生成 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 细胞株、细菌、慢病毒载体(同第一、二部分) |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 计算机信息学相关网站和计算机分析软件 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 生物信息软件微阵列分析(Microarray analysis)与LINC00667相关的RNA结合蛋白 |
| 3.2 Real time-qPCR方法检测肺腺癌标本中VEGFA及EIF4A3的表达 |
| 3.3 上调VEGFA慢病毒载体转染SPC-A1和H1299细胞 |
| 3.4 Westem-blot方法检测沉默LINC006676对SPC-A1和H1299细胞中VEGFA、EIF4A 表达的影响 |
| 3.5 Westem-blot方法检测沉默EIF4A3对SPC-A1和H1299细胞中VEGFA表达的影响 |
| 3.6 双荧光素酶报告检测(Dual-luciferase reporter assay) |
| 3.7 RNA免疫沉淀(RIP)分析 |
| 3.8 RNA pull-down assay |
| 3.9 Fluorescence in situ hybridization (FISH) |
| 3.10 统计学分析 |
| 4 结果 |
| 4.1 微阵列分析结果 |
| 4.2 沉默LINC00667对VEGFA表达影响 |
| 4.3 过表达VEGFA细胞功能验证结果 |
| 4.4 EIF4A3表达水平的检测结果 |
| 4.5 抑制EIF4A3活性后细胞功能验证结果 |
| 4.6 VEGFA为LINC00667影响NSCLC的靶点 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 综述 脉管生成机制及其在肿瘤中的作用 |
| 参考文献 |
| 个人简历、在校期间发表论文 |
| 致谢 |
（10）脂多糖诱导MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的可能机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 仪器设备 |
| 1.3 主要试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 乳腺癌细胞株复苏 |
| 2.2 乳腺癌细胞株的培养 |
| 2.3 LPS的配制 |
| 2.4 细胞增殖实验 |
| 2.5 细胞划痕实验 |
| 2.6 细胞侵袭实验 |
| 2.7 VEGF-R2 ELISA测定 |
| 2.8 VEGF-D ELISA测定(方法同2.7) |
| 3 统计学方法 |
| 4 结果 |
| 4.1 脂多糖对MDA-MB-231细胞增殖的影响 |
| 4.2 脂多糖对MDA-MB-231细胞迁移的影响 |
| 4.3 脂多糖对MDA-MB-231细胞侵袭的影响 |
| 4.4 脂多糖对MDA-MB-231 细胞VEGF-R2 表达的影响 |
| 4.5 脂多糖对MDA-MB-231 细胞VEGF-D表达的影响 |
| 5 讨论 |
| 5.1 LPS 促进 MDA-MB-231 细胞增殖、迁移及侵袭的作用 |
| 5.2 VEGF家族的相关介绍 |
| 5.3 LPS 与 VEGF-R2 及 VEGF-D 的关系 |
| 5.4 乳腺癌与 VEGF-R2 及 VEGF-D 的关系 |
| 5.5 LPS 促进 MDA-MB-231 细胞恶性生物学行为的可能机制探讨 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 脂多糖对于乳腺癌的影响以及与VEGF相关机制关系的研究 |
| 研究背景 |
| 肿瘤微环境中促进肿瘤转移的相关因素 |
| 脂多糖对于肿瘤微环境的影响 |
| 脂多糖对于乳腺癌的影响 |
| 与乳腺癌血管新生相关的血管内皮生长因子 |
| 与乳腺癌淋巴管生成相关的血管内皮生长因子 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
四、血管内皮生长因子在肿瘤中的作用（论文参考文献）
- [1]VEGFR-3、MCM2的表达及D2-40标记的MLVD与食管鳞癌预后相关性分析[D]. 唐晟杰. 遵义医科大学, 2021(01)
- [2]菊苣酸作用BM-EPCs抑制血管生成的体外实验研究[D]. 令狐熙涛. 遵义医科大学, 2021(01)
- [3]MYH9通过诱导血管生成和上皮间质转化促进食管鳞癌转移的研究[D]. 郭敏. 山西医科大学, 2021
- [4]苦参素对HepG2细胞条件培养基诱导的人脐静脉内皮细胞血管生成作用的研究[D]. 覃小珊. 右江民族医学院, 2021(01)
- [5]miR-27a-3p靶向调控GATA6在胰腺导管腺癌侵袭转移中作用机制的体外研究[D]. 饶雪峰. 南昌大学, 2021(01)
- [6]miR-876调控POSTN促进肝癌进展和纤维化的机制研究[D]. 陈凯. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [7]肾癌微环境M2巨噬细胞检测与MVD相关性研究[D]. 尹海涛. 河北大学, 2021(11)
- [8]miR-326调控SIRT1/HIF1α/VEGFA轴改善非小细胞肺癌化疗耐药的分子机制[D]. 魏金婴. 吉林大学, 2021(01)
- [9]LINC00667通过稳定VEGFA促进肺腺癌血管生成机制研究[D]. 杨会珍. 郑州大学, 2020(02)
- [10]脂多糖诱导MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的可能机制研究[D]. 欧阳漫多. 南华大学, 2020(01)
标签：血管生成论文; 血管内皮生长因子论文; 细胞生长因子论文; 基因合成论文; 胰腺肿瘤论文;